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在临床前药物开发中，人治疗性蛋白（如单克隆抗体 mAb）常引发抗药物抗体（ADA），影响药代动力学和毒理学评估。研究人员探究短期免疫抑制剂能否诱导免疫耐受，发现他克莫司 / 西罗莫司（TAC/SIR）组合可完全抑制 ADA 形成，维持药物暴露，为临床前研究提供新策略。
在生物药研发的浩瀚海洋中，治疗性蛋白（如单克隆抗体）就像充满潜力的 “未来之星”，但它们在动物模型中常遭遇 “免疫系统卫兵” 的激烈抵抗 —— 抗药物抗体（ADA）的产生。这些 “卫兵” 会加速药物清除，让临床前药代动力学（PK）和毒理学评估陷入迷雾，就像在导航时遇到了风暴，严重干扰安全剂量范围的确定和毒性分析。如何穿越这片风暴海域，让治疗性蛋白在动物模型中顺利 “航行”，成为科研人员亟待解决的难题。
为了攻克这一挑战，美国田纳西大学健康科学中心（University of Tennessee Health Science Center）的研究人员展开了一项关键探索，相关成果发表在《The AAPS Journal》。他们聚焦于短期免疫抑制能否诱导对人源单克隆抗体 Erenumab 的持久免疫耐受，旨在为临床前研究开辟新路径。
研究人员主要采用了以下技术方法：以 Sprague-Dawley 大鼠为模型，设计包含诱导、洗脱、再挑战三阶段的实验周期。通过皮下注射、腹腔注射和灌胃等方式给予 Erenumab 及免疫抑制剂（甲氨蝶呤 MTX、他克莫司 TAC / 西罗莫司 SIR 组合）。运用酸解离桥接电化学发光免疫分析（ECLIA）检测 ADA，ECLIA 免疫分析法测定 Erenumab 浓度，结合非房室药代动力学分析计算曲线下面积（AUC），并通过动态光散射和荧光显微镜验证抗体聚集体形成。
免疫抑制对 Erenumab 单体免疫原性的影响
在针对 Erenumab 单体的研究中，三组免疫抑制方案与对照组展现出不同的 ADA 发生率。对照组在诱导期 ADA 发生率为 0%，再挑战期升至 25%；而 TAC/SIR 组合组在两个阶段均为 0%，完全抑制 ADA 形成。甲氨蝶呤方案效果较弱，尤其是 5 mg/kg 每周给药组，再挑战期 ADA 发生率高达 62.5%。从 ADA 响应强度和起始时间看，对照组 ADA 阳性动物在洗脱期响应增强，再挑战期维持高值；TAC/SIR 组全程无响应；甲氨蝶呤组部分动物响应提前且强度更高。药代动力学结果显示，ADA 阳性动物的 Erenumab 暴露量显著降低，而 TAC/SIR 组全程维持暴露量，与对照组 ADA 阴性动物相当。
免疫抑制对 Erenumab 聚集体免疫原性的影响
鉴于聚集体通常具有更强免疫原性，研究人员在第二阶段使用 Erenumab 聚集体进行实验。对照组诱导期 ADA 发生率为 30%，再挑战期达 60%，而 TAC/SIR 组仍保持 0%，且再挑战期 ADA 发生率差异具有统计学意义（P<0.05）。聚集体导致 ADA 响应起始时间提前至第 4 周，对照组 ADA 阳性动物暴露量在诱导期和再挑战期分别下降约 60% 和 80%，而 TAC/SIR 组所有动物均维持暴露量。
讨论与结论
他克莫司与西罗莫司的协同作用通过抑制 T 细胞活化（如 IL-2 依赖通路）和促进调节性 T 细胞（Treg）扩增，实现了对 ADA 的长效抑制，且在洗脱期后仍能维持免疫耐受。相比之下，甲氨蝶呤单一作用机制（抑制 T 细胞增殖）效果有限，高剂量还可能引发短暂毒性。研究表明，TAC/SIR 组合不仅能在短期免疫抑制期间发挥作用，更能诱导超越治疗周期的持久耐受，这对临床前 PK 和毒理学评估至关重要，尤其适用于高免疫原性治疗性蛋白的研发。
这项研究为临床前药物开发提供了关键突破，揭示了短期免疫抑制方案诱导持久免疫耐受的潜力。通过 TAC/SIR 组合抑制 ADA 形成，可确保治疗性蛋白在动物模型中的有效暴露，助力安全剂量确定和毒性评估，为后续治疗性蛋白（尤其是高免疫原性药物）的研发铺平了道路，也为解决酶替代疗法（ERT）等长期治疗中的免疫原性问题提供了新方向。
