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慢性乙肝感染治疗面临挑战，功能性治愈需深入理解 HBsAg 免疫机制。本研究利用小鼠模型，揭示肝内 Batf3+XCR1+CCR7- cDC1 通过 MHC-I 交叉穿衣（cross-dressing）激活 CD8+T 细胞，B 细胞依赖 CCR5 和 EBI2 引导 CD4+T 细胞应答，为治疗提供新方向。
乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球重大公共卫生问题，慢性感染可引发肝硬化和肝癌。目前治疗目标是实现 HBsAg 持续清除的功能性治愈，但现有疗法效果有限。核心挑战在于 HBV 仅感染肝细胞并产生大量亚病毒颗粒（含 HBsAg），而 HBsAg 如何被呈递给 T 细胞以激活免疫应答的机制尚不明确。传统认知中，树突状细胞（DC）主导抗原呈递，但 HBV 的肝向性和弱天然免疫激活特性，使得经典理论的适用性存疑，亟需揭示 HBsAg 特异性 T 细胞应答的新型机制。
复旦大学研究团队针对这一科学问题，利用多种 HBV 替代小鼠模型（如 hydrodynamic injection 质粒模型、重组腺病毒模型等），结合单细胞测序（scRNA-seq）、流式细胞术、细胞过继转移和基因敲除技术，系统解析了 HBsAg 诱导 T 细胞免疫的细胞间互作机制。研究成果发表于《Nature Communications》，为慢性乙肝免疫治疗提供了关键理论依据。
研究采用的主要技术方法包括：1. 单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）分析急性乙肝患者外周血和肝组织免疫细胞转录组；2. 构建 HBV 表面抗原融合 OVA 表位的重组质粒（如 pHBV1.3/OVA257-264），通过 hydrodynamic injection 建立小鼠模型；3. 流式细胞术检测抗原呈递细胞表面 MHC - 抗原复合物及 T 细胞活化标志物；4. 基因敲除小鼠（如 Batf3 KO、EBI2 KO）和抗体阻断实验验证关键细胞亚群和信号通路的作用；5. 免疫荧光显微镜观察 B 细胞与 T 细胞在淋巴组织中的空间互作。
肝内 cDC1 通过 MHC-I 交叉穿衣激活 CD8+T 细胞
研究发现，肝内 Batf3+XCR1+CCR7-传统树突状细胞（cDC1）是激活 CD8+T 细胞的关键抗原呈递细胞。通过单细胞测序和流式细胞术证实，cDC1 表面富集 HBsAg 肽 - MHC-I 复合物（如 H-2Kb-SIINFEKL），且其激活 CD8+T 细胞的能力不依赖自身 MHC-I 表达，而是通过 “交叉穿衣”（cross-dressing）机制获取肝细胞或肝窦内皮细胞（LSEC）来源的 MHC-I - 抗原复合物。基因敲除实验显示，阻断 XCR1/XCL1 信号或清除 cDC1 可完全抑制 CD8+T 细胞增殖，证明 cDC1 通过非经典抗原呈递途径驱动细胞免疫。
B 细胞主导 CD4+T 细胞应答的双阶段机制
在淋巴组织中，B 细胞而非 cDCs 负责启动 CD4+T 细胞应答。HBsAg 通过非调理依赖途径直接进入脾和淋巴结的 B 细胞滤泡，激活 HBsAg 特异性 B 细胞。借助 S129G1HL敲入小鼠模型，发现 B 细胞通过 BCR 识别抗原后，首先在滤泡内通过 CCR5-CCL3/4 信号吸引 CD4+T 细胞，随后在滤泡间区依赖 EBI2-7α,25 - 二羟基胆固醇信号引导 T 细胞迁移和分化。B 细胞缺失（μMT 小鼠）导致 CD4+T 细胞激活完全缺陷，证实其核心作用。
共刺激信号对 T 细胞应答的调控
通过 NicheNet 算法和阻断实验，鉴定出 ALCAM-CD6 和 LFA-1-CD80 分别为 cDC1-CD8+T 细胞和 B 细胞 - CD4+T 细胞互作的关键共刺激通路。cDC1 组成性表达 ALCAM，其与 T 细胞表面 CD6 结合是 CD8+T 细胞增殖的必要条件；而 B 细胞依赖 LFA-1 和 CD80 提供共刺激信号，促进 CD4+T 细胞分化为效应细胞和滤泡辅助性 T 细胞（Tfh）。
研究结论与意义
本研究颠覆了传统认知，揭示 HBsAg 通过非经典抗原呈递途径激活 T 细胞的双重机制：肝内 cDC1 通过交叉穿衣呈递 MHC-I 抗原激活 CD8+T 细胞，淋巴组织中 B 细胞依赖 CCR5/EBI2 引导 CD4+T 细胞应答。关键靶点如 ALCAM、LFA-1、CD80 的发现，为设计新型疫苗（如靶向 cDC1 的纳米颗粒疫苗）和免疫疗法（如增强 B 细胞共刺激信号）提供了明确方向。此外，研究首次证实 B 细胞在无明显炎症条件下直接捕获大颗粒抗原的能力，拓展了对病毒抗原呈递路径的理解，对其他嗜肝病毒和肿瘤免疫研究具有借鉴意义。未来可进一步探索 cDC1 交叉穿衣的分子机制及慢性感染中 B 细胞功能耗竭的逆转策略，推动慢性乙肝功能性治愈的临床转化。
