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为探讨 AHNAK2 在结直肠癌（CRC）5 - 氟尿嘧啶（5-FU）耐药中的作用，研究人员通过数据库分析、细胞模型构建及多组学实验发现，AHNAK2 高表达与 CRC 患者不良预后相关，其通过激活 AKT/GSK-3β 通路增强 5-FU 耐药性，为逆转耐药提供新靶点。
结直肠癌（Colorectal Cancer, CRC）作为全球第三大常见恶性肿瘤，其治疗面临着化疗耐药的严峻挑战。5 - 氟尿嘧啶（5-Fluorouracil, 5-FU）是晚期 CRC 的基础化疗药物，但临床中 5-FU 耐药的发生常导致治疗失败，患者预后不佳。因此，深入探究 5-FU 耐药的分子机制、寻找有效的逆转策略成为亟待解决的医学难题。在此背景下，空军军医大学西京医院消化病医院的研究人员开展了相关研究，旨在揭示 AHNAK 核蛋白 2（AHNAK nucleoprotein 2, AHNAK2）在 CRC 5-FU 耐药中的作用及机制，该研究成果发表在《Clinical and Experimental Medicine》。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：利用 GEPIA 和 Kaplan–Meier Plotter 数据库分析 AHNAK2 表达与 CRC 患者预后的关联；收集 59 例 CRC 组织样本（含 30 例 5-FU 耐药和 29 例 5-FU 敏感样本），通过免疫组化、qRT-PCR 和 Western blot 检测 AHNAK2 表达；采用逐步递增浓度 5-FU 处理构建 LoVo/5-FU 和 HCT116/5-FU 耐药细胞系；通过慢病毒转染实现 AHNAK2 敲低或过表达；运用 CCK-8 实验、集落形成实验、流式细胞术、伤口愈合实验、Transwell 实验及肿瘤异种移植模型（BALB/c 裸鼠）评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及体内成瘤能力；借助 Western blot 分析 AKT/GSK-3β 通路相关蛋白表达。
高表达 AHNAK2 与 CRC 患者不良预后及化疗耐药相关
通过 GEPIA 数据库分析发现，AHNAK2 mRNA 高表达与 CRC 患者总生存期（Overall Survival, OS）缩短（p=0.0068，HR=2.0）、无病生存期（Disease-Free Survival, DFS）减少（p=0.022，HR=1.8）显著相关。Kaplan–Meier Plotter 分析显示，AHNAK2 高表达患者的 OS（p=1.8×10-8，HR=1.8）和无复发生存期（Recurrence-Free Survival, RFS）（p=3.4×10-13，HR=2.16）均显著降低，且在接受化疗的患者中这种关联更为明显。
AHNAK2 在 5-FU 耐药 CRC 组织和细胞中显著上调
免疫组化结果显示，CRC 组织中 AHNAK2 蛋白表达显著高于正常肠黏膜组织，且 5-FU 耐药肿瘤中的表达水平最高。qRT-PCR 和 Western blot 验证，与正常结肠上皮细胞 NCM460 相比，CRC 细胞系（LoVo、HCT116）中 AHNAK2 mRNA 和蛋白表达升高，而 5-FU 耐药细胞系（LoVo/5-FU、HCT116/5-FU）中的表达进一步增加。
AHNAK2 增强 5-FU 耐药 CRC 细胞的增殖、周期进展和侵袭能力，抑制凋亡
敲低 LoVo/5-FU 细胞中的 AHNAK2 可减少集落形成数量，诱导细胞周期阻滞于 G0/G1 期，促进凋亡；而过表达 HCT116/5-FU 细胞中的 AHNAK2 则增强集落形成能力，加速 G1/S 期转换，抑制凋亡。伤口愈合和 Transwell 实验表明，AHNAK2 敲低显著降低细胞迁移和侵袭能力，过表达则增强这些恶性表型。
AHNAK2 通过激活 AKT/GSK-3β 信号通路介导 5-FU 耐药
机制研究发现，AHNAK2 敲低可降低 LoVo/5-FU 细胞中增殖标志物 PCNA、细胞周期蛋白 CDK4 及磷酸化 AKT（p-AKT/AKT）、磷酸化 GSK-3β（p-GSK-3β/GSK-3β）的表达，同时增加凋亡标志物 cleaved caspase-3 和上皮标志物 E-cadherin 的表达；与之相反，AHNAK2 过表达在 HCT116/5-FU 细胞中产生了反向调控作用，证实 AHNAK2 通过激活 AKT/GSK-3β 信号通路发挥作用。
AHNAK2 敲低在体内抑制 5-FU 耐药
裸鼠异种移植实验显示，敲低 AHNAK2 的 LoVo/5-FU 细胞在注射 5-FU 后肿瘤体积和重量显著小于对照组，qRT-PCR 和 Western blot 证实肿瘤组织中 AHNAK2 表达降低，p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β 活性受到抑制，cleaved caspase-3 表达增加。
研究结论与意义：本研究首次证实 AHNAK2 通过激活 AKT/GSK-3β 信号通路降低 CRC 对 5-FU 的化疗敏感性，其高表达与患者不良预后密切相关。该发现不仅揭示了 CRC 5-FU 耐药的新机制，还为临床逆转耐药提供了潜在治疗靶点 ——AHNAK2，有望通过干预该分子或其下游通路开发新型治疗策略，改善 CRC 患者的治疗效果和预后。研究结果为精准肿瘤学中克服化疗耐药提供了重要理论依据，具有转化医学研究价值。
