锌指抑制子驱动表观遗传沉默免疫检查点和 TGFBR2 增强 CAR-T 细胞和肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性

本文聚焦 CAR-T 细胞和肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）治疗实体瘤的挑战，探究锌指抑制子（ZFRs）通过表观遗传沉默免疫检查点（如 PD-1、LAG-3、TIM-3、TIGIT）及 TGF-β 受体 2（TGFBR2）增强抗肿瘤活性的作用，为克服肿瘤微环境（TME）免疫抑制提供新策略。

　　

嵌合抗原受体 T（CAR-T）细胞疗法在血液肿瘤治疗中成效显著，但受限于实体瘤的免疫抑制性肿瘤微环境（TME），如转化生长因子 β（TGF-β）信号传导和免疫检查点（ICs）上调，且实体瘤缺乏通用肿瘤特异性靶点。肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）虽富含肿瘤抗原特异性 T 细胞受体（TCR）克隆，但常因 TME 呈现耗竭或功能障碍表型。传统基因编辑技术如 CRISPR-Cas9 虽有效，却存在诱导基因组双链断裂及突变风险，而多重锌指抑制子（ZFRs）作为表观遗传沉默工具，无需切割 DNA 即可抑制基因表达，安全性更高。

研究首先筛选出靶向 PDCD1 基因转录起始位点（TSS）区域的 PD-1 ZFR 候选分子，在 CD19-CAR-T 细胞中，PD-1 ZFR 可稳定抑制 PD-1 表达，且不影响 T 细胞活力、增殖及功能，如 CD69 激活标记、CD107a 脱颗粒标记表达及干扰素 γ（IFN-γ）、白细胞介素 - 2（IL-2）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）等细胞因子分泌。在小鼠 B 细胞淋巴瘤模型中，PD-1 抑制的 CD19-CAR-T 细胞显著增强抗肿瘤活性，延长小鼠生存期，且 PD-1 抑制效果在体内持续半年以上。

对于 TILs，从结直肠癌肝转移（CRLMs）患者肿瘤组织中分离的 TILs 经 PD-1 ZFR 转导后，PD-1 表达抑制率达 90%，但单独抑制 PD-1 未显著提升其体外杀瘤能力。进一步开发靶向 PD-1 与其他 ICs（LAG-3、TIM-3、TIGIT）或 TGFBR2 的多重 ZFR 慢病毒载体（LVs），发现 PD-1 与 LAG-3 或 TGFBR2 共抑制可显著增强 TILs 的细胞毒性，而与 TIM-3 或 TIGIT 共抑制效果不显著，可能与受体功能差异及配体表达水平有关。

TGF-β 信号通路在 TME 中可抑制 T 细胞浸润和功能，靶向 TGFBR2 与 PD-1 共抑制可减轻 TGF-β 的抑制作用，改善 TILs 抗肿瘤活性。多重 ZFRs 通过沉积组蛋白修饰标记（如 H3K9me3）实现基因沉默，具有模块化设计、低脱靶效应等优势，为同时调控多个免疫抑制通路提供可能。

本研究表明，ZFRs 通过表观遗传沉默 ICs 和 TGFBR2，可增强 CAR-T 细胞和 TILs 的抗肿瘤能力，为实体瘤免疫治疗提供了一种安全且有效的新策略，尤其在克服 TME 免疫抑制方面展现出潜力，未来有望通过个性化选择靶向组合进一步提升临床疗效。