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为解析豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)卵巢脂滴形成与脂质沉积分子机制,研究人员对 PG、PV、MV 三阶段卵巢开展转录组分析。发现脂转运(如FATP、APOEB)、代谢(如ELOVL6、DGAT2)相关基因及 Wnt、mTOR 等通路关键作用,为海水鱼繁殖研究及养殖提供基础。
在海洋水产领域,豹纹鳃棘鲈(
Plectropomus leopardus)作为具有重要经济价值的雌雄同体海水鱼类,其人工养殖规模正不断扩大。然而,当前养殖过程中面临着人工繁殖效率低、卵子质量与孵化率不佳、卵巢发育周期长等突出问题。这些问题的核心症结在于,学界对其卵巢发育过程中脂滴形成与脂质沉积的分子机制知之甚少。脂滴作为储存脂质的动态细胞器,在鱼类卵子成熟及胚胎发育中扮演关键角色,其形成过程涉及复杂的基因调控与信号通路网络。因此,深入探究豹纹鳃棘鲈卵巢脂滴发育的分子基础,对提升卵子质量、优化繁殖技术具有迫切的现实需求。
为攻克这一科学难题,广东海洋大学的研究团队开展了系统性研究。该团队以不同发育阶段的豹纹鳃棘鲈卵巢为研究对象,通过转录组测序与生物信息学分析,揭示了脂代谢相关基因及信号通路在脂滴形成中的调控作用。研究成果发表于《Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics》,为海水鱼类繁殖生物学研究提供了重要的理论支撑。
研究人员主要采用了以下关键技术方法:首先,收集 12、18、24 月龄(分别对应初级生长期 PG、卵黄发生前期 PV、卵黄发生中期 MV)的豹纹鳃棘鲈卵巢组织,每个阶段选取 3 尾雌鱼,通过组织学观察确定卵巢发育分期;随后,构建 9 个 cDNA 文库进行转录组测序,获取 5.34×10^8 条原始 reads,并进行差异表达基因(DEGs)筛选与功能富集分析;最后,利用实时荧光定量 PCR(qPCR)对 10 个脂代谢相关基因进行表达验证,确保转录组数据的可靠性。
卵巢不同发育阶段的特征分析
通过组织学观察发现,PG 阶段卵巢以初级生长卵母细胞为主,具有未凝聚染色质、丰富原始生殖细胞及明显核仁;PV 阶段卵母细胞染色质凝聚,皮质 alveoli(CA)开始形成;MV 阶段则可见大量卵黄颗粒沉积,脂滴数量与体积显著增加,逐步成为卵母细胞的主要成分。
转录组数据与差异基因分析
转录组测序共鉴定出 19,155 个基因,其中 13,817 个为各阶段共表达基因。通过比较分析发现,PG vs PV 阶段有 1,012 个基因上调、168 个下调;PV vs MV 阶段上调基因 2,609 个、下调 277 个;MV 阶段相对 PV 阶段则有 4,039 个上调基因与 577 个下调基因。这些差异基因主要富集于脂质转运、脂肪酸代谢和磷脂代谢通路。
关键基因与信号通路解析
脂质转运相关基因如脂肪酸转运蛋白(FATP1、FATP4、FATP6)、载脂蛋白 B(APOEB)、脂蛋白脂酶(LPL)及脂肪酸结合蛋白(FABPs),在脂滴的脂肪酸摄取与运输中起核心作用。脂肪酸代谢通路中的ELOVL6(超长链脂肪酸延伸酶 6)、ACSL1(脂酰辅酶 A 合成酶 1)、DGAT2(二酰甘油酰基转移酶 2)和GPAT4(甘油 - 3 - 磷酸酰基转移酶 4),则参与脂肪酸的合成与酯化过程,促进脂滴核心结构形成。磷脂代谢相关基因如EPT1(乙醇胺磷酸转移酶 1)、CHKA(胆碱激酶 α)和PLA2G15(磷脂酶 A2 组 XV),通过调控磷脂合成与分解,影响脂滴膜结构的稳定性。
信号通路分析表明,Wnt 通路调控细胞极性与脂滴分布,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路通过调控脂质合成基因表达促进脂滴生长,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)通路介导脂肪酸 β- 氧化与储存的平衡,磷脂酰肌醇 3 - 激酶 / 蛋白激酶 B(PI3K/Akt)通路则通过调节细胞存活与代谢状态影响脂滴动态。
研究结论与意义
本研究首次系统揭示了豹纹鳃棘鲈卵巢脂滴形成的分子机制,提出 “极低密度脂蛋白(VLDL)水解 - 脂肪酸转运 - 脂质合成” 的调控模型。研究证实,脂代谢相关基因通过多通路协同作用,精准调控脂滴的动态生成与脂质沉积过程。这些发现不仅深化了对硬骨鱼类卵巢发育机制的认知,更为海水鱼类繁殖调控提供了关键靶点,例如通过调控FATP、LPL等基因表达优化脂质供给,或利用 PPAR/mTOR 通路激活剂促进卵子成熟。在应用层面,该研究成果有望为豹纹鳃棘鲈的良种选育、人工催产技术改良及苗种规模化生产奠定理论基础,对推动海洋牧场建设与水产养殖业可持续发展具有重要意义。