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为解决谷物中黄曲霉毒素 B?（AFB?）和赭曲霉毒素 A（OTA）污染检测难题，研究人员开发双特异性单克隆抗体，建立竞争性直接 ELISA（cdELISA）和双分析物免疫层析试纸条。cdELISA 检测限低，试纸条可视化检测，回收率良好，为食品安全监测提供高效方法。
民以食为天，谷物作为全球主要粮食来源，其安全性至关重要。然而，谷物在生产储存过程中极易受到霉菌毒素侵袭，尤其是黄曲霉毒素 B?（AFB?）和赭曲霉毒素 A（OTA）。AFB?是强致癌物质，被国际癌症研究机构（IARC）列为 1 类致癌物，具有肝毒性、致畸性和免疫抑制性；OTA 则属于 2B 类致癌物，具有肾毒性、肝毒性等多种毒性，二者常共同污染食品，严重威胁公众健康和食品安全。传统检测方法如高效液相色谱（HPLC）等虽准确，但设备昂贵、操作复杂，难以满足现场快速筛查需求，开发简便、灵敏的多毒素同时检测技术迫在眉睫。
为解决这一难题，中山医学大学的研究人员开展了相关研究，旨在开发一种高效检测 AFB?和 OTA 的新方法。研究成果发表在《Food Chemistry》上。
研究人员采用杂交瘤细胞融合技术，将 AFB?特异性杂交瘤细胞（9C7C11）与 OTA 特异性杂交瘤细胞（9C9H9）融合，成功制备出能同时识别 AFB?和 OTA 的双特异性单克隆抗体。基于该抗体，建立了竞争性直接酶联免疫吸附测定法（cdELISA）和双分析物免疫层析试纸条（immunostrip）。
材料与方法
研究使用了 AFB?、OTA 等标准品及相关试剂，通过杂交瘤细胞融合技术获得双特异性单克隆抗体，经流式细胞术筛选出双荧光阳性细胞株。利用该抗体建立 cdELISA 和免疫层析试纸条，对方法的灵敏度、特异性和回收率等性能进行评估，并应用于实际谷物样品检测，与 HPLC 结果对比验证方法可靠性。
结果
- 抗体性能与方法灵敏度：流式细胞术显示约 88% 的融合细胞为双荧光阳性。cdELISA 对 AFB?的半数抑制浓度（IC??）为 0.06 ng/mL，检测限（LOD）低至 0.004 ng/mL；对 OTA 的 IC??为 1.02 ng/mL，LOD 为 0.24 ng/mL，灵敏度显著高于传统单毒素检测方法。免疫层析试纸条对 AFB?和 OTA 的可视化检测限分别为 0.5 ng/mL 和 5 ng/mL，可实现现场快速定性筛查。
- 特异性与回收率：双特异性抗体与 AFB?、AFG?等结构类似物存在一定交叉反应，但对 AFB?和 OTA 具有主要识别能力。在加标谷物样品中，AFB?回收率为 91%-110%，OTA 回收率为 99%-107%，表明方法准确性良好。
- 实际样品检测：应用 cdELISA 对 15 份谷物样品进行检测，AFB?和 OTA 污染情况与 HPLC 分析结果一致，验证了该方法的可靠性。
结论与讨论
本研究通过杂交瘤细胞融合技术成功制备 AFB?/OTA 双特异性单克隆抗体，并建立了高灵敏度的 cdELISA 和便捷的免疫层析试纸条检测方法。该方法实现了两种毒素的同时检测，突破了传统免疫分析方法单毒素检测的局限，避免了多抗体体系可能存在的干扰问题，为食品中多霉菌毒素快速检测提供了新策略。其简单、灵敏、低成本的特点，尤其适合资源有限地区的大规模筛查，有助于提升食品安全监测效率，对保障公众健康和农业经济具有重要意义。研究结果表明，双特异性抗体技术在食品污染物检测领域具有广阔应用前景，为下一代食品安全诊断技术的发展奠定了基础。
