N6-甲基腺苷（m6A）RNA修饰调控自然杀伤细胞NKG2D依赖性与细胞毒性基因表达的研究

本研究针对乳腺癌（BC）患者自然杀伤（NK）细胞功能异常的机制，通过分析NKG2D信号通路关键基因的m6A修饰水平，发现NKG2D转录本3'UTR区m6A水平升高伴随mRNA表达降低，而ERK2和PRF1则呈现相反趋势。研究首次揭示m6A修饰通过调控NK细胞效应分子表达影响肿瘤免疫监视功能，为开发基于RNA表观遗传调控的癌症免疫治疗提供新靶点。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，自然杀伤（NK）细胞的抗肿瘤功能异常一直是制约疗效的关键瓶颈。尽管已知NK细胞表面激活受体NKG2D（Killer Cell Lectin Like Receptor K1）的表达下调与多种癌症进展相关，但其分子机制尚未完全阐明。近年来，RNA表观遗传修饰N⁶-甲基腺苷（m⁶A）被发现在免疫调控中发挥重要作用，但在NK细胞中的功能研究仍属空白。德国莱布尼茨工作环境与人类因素研究所、德国大学开罗分校等机构的研究人员Raghda A. Elsabbagh和Ghada Abdelhady等人在《BMC Medical Genomics》发表的研究，首次系统揭示了m⁶A修饰通过调控NKG2D信号通路影响NK细胞抗肿瘤功能的分子机制。

研究采用甲基化RNA免疫共沉淀（MeRIP）结合qPCR技术检测乳腺癌患者与健康对照NK细胞中9个关键基因的m⁶A修饰谱；通过CRISPR/CAS9敲除m⁶A去甲基化酶FTO和ALKBH5，以及甲基化酶抑制剂甲氯芬那酸（MA）处理，在体外培养的原代NK细胞中人为改变m⁶A水平；运用流式细胞术和Western blot分析蛋白表达，结合⁵¹Cr释放实验和CD107a脱颗粒实验评估NK细胞功能。

研究结果显示：在乳腺癌患者NK细胞中，NKG2D转录本3'UTR区m⁶A水平显著升高（1.7倍），伴随mRNA表达量降低；而ERK2（MAPK1）和穿孔素（PRF1）则呈现m⁶A水平降低与mRNA表达升高的反向调控模式。生物信息学预测发现NKG2D转录本含有7个m⁶A修饰位点，主要富集在3'UTR区。体外实验证实，MA处理使NK细胞m⁶A整体水平增加50-70%，导致NKG2D、PI3K等基因mRNA表达下调，但蛋白水平及细胞毒性功能未受影响。双去甲基化酶FTO/ALKBH5敲除实验显示，m⁶A修饰对不同靶基因的调控具有特异性：VAV1蛋白在ALKBH5敲除后显著降低，而PRF1在两种敲除细胞中均减少，但流式检测未发现显著性差异。

讨论部分指出，该研究首次建立了m⁶A修饰与NK细胞抗肿瘤功能间的分子联系：3'UTR区m⁶A修饰通过促进mRNA降解负调控基因表达，这与在T细胞等免疫细胞中的发现一致。值得注意的是，虽然mRNA水平变化显著，但蛋白表达和细胞功能保持稳定，提示NK细胞存在复杂的翻译调控机制补偿m⁶A介导的转录本不稳定性。研究局限性包括患者样本量较小（n=16），以及未能检测内源性m⁶A修饰酶的表达变化。

该研究的创新价值在于：为肿瘤微环境诱导NK细胞功能耗竭提供了表观转录组学解释；揭示m⁶A修饰可作为预测NK细胞免疫治疗响应的潜在生物标志物；提示靶向m⁶A修饰酶（如FTO抑制剂）可能成为增强NK细胞抗肿瘤活性的新策略。未来研究可拓展至其他癌症类型，并探索m⁶A阅读蛋白（如YTHDF2）在NK细胞功能调控中的具体作用机制。