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烟曲霉（Aspergillus fumigatus）感染面临 azole 类药物耐药难题，现有抗真菌药仅三类。研究人员开发真菌靶向纳米胶束递送微小 RNA（miRNA）策略，靶向毒力因子 1,8 - 二羟基萘（DHN）- 黑色素合成相关基因alb1，显著降低其表达与蛋白水平，增强真菌对氧化应激和中性粒细胞攻击的敏感性，为抗真菌治疗提供新方向。
烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是引发侵袭性曲霉病的主要病原体，每年导致超过 210 万免疫缺陷患者感染，死亡率高达 80% 以上。当前临床一线抗真菌药物仅包括靶向麦角固醇的 azole 类和多烯类、以及抑制 β-1,3 - 葡聚糖合成的棘白菌素类，但烟曲霉对 azole 类耐药性逐年攀升，世界卫生组织已将其列为威胁公共卫生的首要真菌病原体。开发作用机制新颖的抗真菌疗法迫在眉睫。
在此背景下，东京医科大学（Tokyo Medical University）的研究团队开展了一项创新研究，尝试利用微小 RNA（microRNA, miRNA）调控真菌毒力因子表达，为抗真菌治疗开辟新路径。相关成果发表于《Scientific Reports》。
主要技术方法
研究采用以下关键技术：① 通过 miRbase 数据库筛选靶向烟曲霉alb1基因（编码参与 DHN - 黑色素合成的关键酶）的人类 miRNA 模拟物，经荧光标记验证其在原生质体中的转染效率；② 构建 3×HA 标签融合的 Alb1 蛋白表达菌株（Alb1-HAp），结合 Western blotting 技术检测蛋白翻译水平变化；③ 利用聚乙烯 glycol（PEG）- 聚氨基酸共聚物制备靶向真菌的 Dectin-1 安装纳米胶束，实现 miRNA 向完整真菌细胞的递送；④ 通过过氧化氢（H?O?）氧化应激实验和中性粒细胞杀伤实验，评估 miRNA 转染对真菌抗逆性和免疫清除敏感性的影响。
研究结果
1. miRNA 模拟物筛选与基因调控验证
通过生物信息学分析，筛选出 hsa-miR-3667-5p 和 hsa-miR-4738-3p 作为高互补性候选 miRNA。荧光显微镜观察显示，两者均可有效转染烟曲霉原生质体，转染后 12 小时alb1 mRNA 表达量分别降低 3.7 倍（10 nM）和 1.9 倍（40 nM）。Western blotting 证实，hsa-miR-3667-5p（40 nM）可使 Alb1-HAp 蛋白水平降低至 30%，表明 miRNA 通过转录后调控抑制靶基因表达。
2. 毒力因子抑制增强真菌应激敏感性
DHN - 黑色素是烟曲霉抵抗氧化应激的关键毒力因子。miRNA 转染导致黑色素合成减少，使真菌对 H?O?诱导的氧化应激耐受性下降 —— 转染组分生孢子在 1.1 mM H?O?处理后菌落形成单位（CFU）减少 20-25%，而未转染组无显著变化。此外，miRNA 转染菌株与小鼠中性粒细胞共培养时，CFU 清除率从对照组的 38% 提升至 58%-59%，表明抑制alb1可增强真菌对宿主免疫攻击的敏感性。
3. 纳米胶束实现完整真菌细胞的 miRNA 递送
研究团队开发的 Dectin-1 安装纳米胶束可特异性结合真菌菌丝表面，通过共聚焦显微镜观察到荧光标记的 miRNA 成功进入带有细胞壁的完整真菌细胞。与未加载 miRNA 的胶束相比，载药胶束处理组分生孢子在 H?O?应激后 CFU 减少约 50%，证实该递送系统可有效将 miRNA 递送至靶细胞并发挥功能。
研究结论与意义
本研究首次证实，利用真菌靶向纳米胶束递送 miRNA 可特异性抑制烟曲霉毒力因子alb1的表达，通过降低黑色素合成增强真菌对氧化应激和宿主免疫的敏感性。尽管仍需解决体内递送效率、脱靶效应及长期毒性等问题，但该策略突破了传统抗真菌药物的作用机制，为应对耐药真菌感染提供了 “基因调控 + 精准递送” 的双重创新思路。未来若与动物模型验证及药代动力学优化结合，有望推动 RNA 疗法在临床抗真菌领域的应用，为全球真菌感染治疗困境提供新解决方案。
