编辑推荐：
在 IgG 染色评估血脑屏障（BBB）完整性研究中，非特异性结合常干扰结果。研究人员采用 HRP - 聚合物法和 SABC 法，评估 H?O?、加热、过氧化氢酶抑制剂对小鼠脑切片背景染色的影响。发现加热或 H?O?联合 3 - AT 可显著降低背景，为 BBB 渗漏检测提供新方法。
在生命科学与医学研究领域，血脑屏障（BBB）的重要性不言而喻。它作为由内皮细胞、周细胞、星形胶质细胞终足和基底膜构成的多细胞结构，宛如一道精密的屏障，严格调控着离子、神经递质、大分子等物质在血液与中枢神经系统之间的交换，对维持中枢神经系统的稳态起着关键作用。然而，这道屏障的破坏却与多种严重疾病紧密相关，比如缺血性脑卒中的出血转化、阿尔茨海默病的认知衰退等。因此，准确检测血脑屏障的完整性至关重要。免疫球蛋白 G（IgG）作为一种内源性蛋白质，相较于荧光素钠、右旋糖酐等物质，是检测血脑屏障渗漏更为合适的标志物，常通过基于辣根过氧化物酶（HRP）的免疫组化染色技术来实现检测。但在实际应用中，一个棘手的问题长期困扰着研究人员，那就是 IgG 染色时常常出现显著的非特异性背景染色，这严重干扰了对实验结果的准确解读，使得亟需找到有效的方法来消除这种背景干扰。
为了解决这一难题，浙江海洋大学的研究人员开展了相关研究。他们的研究成果发表在《Acta Histochemica》上，为该领域提供了重要的解决思路。
研究人员主要采用了两种关键技术方法：一是基于 HRP 的聚合物法，该方法将抗体和 HRP 紧密结合到葡聚糖分子上，后经改进使用更小聚合物以提高穿透效率；二是链霉亲和素 - 生物素复合物（SABC）法，基于链霉亲和素与生物素的强特异性反应，通过生物素化二抗和 HRP 与链霉亲和素连接来实现检测。实验使用了未处理小鼠和大脑中动脉闭塞（MCAO）模型小鼠的脑切片作为样本。
H?O?孵育对石蜡包埋脑切片免疫组化或 IgG 染色并非必需
在探讨 H?O?孵育对石蜡包埋组织切片分析的必要性时，研究人员对 C57BL/6J 小鼠脑切片进行了 Sox10、NeuN 免疫组化染色及 IgG 染色实验，分别设置有 3% H?O?预处理 20 分钟和无预处理两组。结果显示，使用聚合物法时，两种条件下背景染色均极少，表明在石蜡包埋脑切片且进行抗原修复的免疫组化或 IgG 染色中，H?O?预处理并非必需。
过氧化氢酶抑制剂与 H?O?联合使用可降低背景染色
对比 SABC 法，当使用聚合物法时，过氧化氢酶抑制剂 3 - 氨基 - 1,2,4 - 三唑（3 - AT）与 H?O?的混合物，在未处理小鼠脑皮质中可使背景染色降低 35.4%±5.7%，在 MCAO 小鼠对侧皮质中降低 36.9%±1.8%，说明二者联合使用能有效降低背景染色。
加热可消除非特异性结合
实验发现，75°C 加热处理足以消除未处理小鼠和 MCAO 小鼠脑切片中的非特异性结合，无论小鼠是否经历 MCAO，加热都展现出了对非特异性背景染色的有效消除作用。
过氧化氢单独预处理无效
研究结果表明，单独使用 H?O?预处理，在未处理小鼠和 MCAO 小鼠的脑切片中，均无法有效去除背景染色，凸显了 H?O?单独使用在消除背景染色方面的局限性。
综合研究结果可知，H?O?预处理仅在与过氧化氢酶抑制剂联合使用时才有助于降低背景染色，而当对组织进行加热处理时，H?O?预处理则并非必要。加热作为一种简单有效的方法，能够消除 IgG 染色背景，为检测血脑屏障渗漏提供了新的可靠手段。该研究解决了长期以来 IgG 染色中非特异性背景干扰的问题，提高了实验结果的准确性和可靠性，为相关疾病的研究和诊断提供了重要的技术支持，有助于推动血脑屏障相关疾病发病机制研究及治疗方法的发展。
