碱性磷酸酶偶联高亲和力磷酸盐转运体参与条斑紫菜低磷胁迫响应机制研究

【字体: 时间:2025年05月20日 来源:Algal Research 4.6

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  推荐:针对海洋尤其是大型海藻养殖区磷酸盐(Pi)限制问题,研究人员对条斑紫菜(Pyropia yezoensis)开展低 Pi 胁迫转录组分析,发现PyALP(碱性磷酸酶)和PyPHO89(Pi 转运体基因)共表达,受 Myb 转录因子调控,为耐低磷品种培育提供理论依据。

  
在海洋生态系统中,磷元素作为核酸、磷脂、ATP 等生物分子的核心组成成分,对植物的生长、繁殖及能量代谢至关重要。然而,磷酸盐(Pi)短缺是自然界普遍存在的现象,尤其在大型海藻养殖区域,随着条斑紫菜(Pyropia yezoensis)养殖密度不断增加,Pi 匮乏问题日益严峻,严重制约了海藻的产量与品质。在此背景下,揭示条斑紫菜应对低磷胁迫的分子机制,成为突破其养殖瓶颈的关键科学问题。

为探明条斑紫菜的低磷响应机制,研究人员开展了相关研究。山东省相关研究机构(结合资助项目推测为国内机构)的科研团队以条斑紫菜幼苗为研究对象,通过多组学技术与分子生物学手段,系统解析了其在低磷环境下的基因表达调控网络。该研究成果发表于《Algal Research》,为海藻耐逆分子机制研究及抗逆品种培育提供了重要理论支撑。

研究主要采用了以下关键技术方法:

  1. 转录组测序与分析:对低 Pi 条件下的条斑紫菜幼苗进行转录组测序,通过 Fastp 过滤原始数据,利用 HISAT2 比对参考基因组,筛选差异表达基因(DEGs)。
  2. 加权基因共表达网络分析(WGCNA):构建基因共表达网络,挖掘与碱性磷酸酶基因(PyALP)协同表达的基因模块。
  3. 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR):验证目标基因在低磷胁迫不同时间点的表达模式。
  4. 生物信息学预测:利用 TargetP、TMHMM 2.0 等工具预测蛋白亚细胞定位及结构特征。
  5. 酶活性测定与磷源利用分析:检测碱性磷酸酶(ALP)活性变化,通过 Biolog PM4A 微板分析条斑紫菜对溶解有机磷(DOP)的利用能力。

分析差异表达基因


研究从不同低磷浓度和胁迫时长的样本中鉴定出 1095 个差异表达基因,其中 35.5% 呈上调趋势。碱性磷酸酶基因(Py07216,命名为PyALP)在所有低磷胁迫样本中显著上调,且上调幅度随胁迫时间延长和 Pi 浓度降低而增大,提示其在低磷响应中起关键作用。

共表达网络与转录因子筛选


通过 WGCNA 和皮尔逊相关性分析,发现磷酸盐转运体基因PyPHO89PyALP呈强共表达关系,同时筛选出 6 个潜在转录因子。启动子分析显示,PyALPPyPHO89的启动子区域均存在 Myb 结合位点。进一步研究发现,转录因子基因Py08914具有保守的 SHLQKYR 基序和富含谷氨酰胺的 C 端序列,符合典型低磷响应转录因子特征。

基因表达动态与酶活性分析


qRT-PCR 结果显示,PyALPPyPHO89在低磷胁迫 6 小时后表达量显著上升,而Py08914在胁迫初期(2-4 小时)表达达到峰值,表明 Myb 转录因子可能通过调控这两个基因的表达,协同介导溶解有机磷的水解与无机磷的吸收。此外,碱性磷酸酶(ALP)活性随低磷胁迫时间延长而增强,且条斑紫菜对磷酸酯和膦酸盐类 DOP 的利用效率相近,揭示其具有广谱的 DOP 水解能力。

磷源利用与生长表型分析


利用 Biolog PM4A 微板检测发现,条斑紫菜能够有效利用多种 DOP 作为磷源,在无机磷匮乏时,可通过水解环境中的有机磷维持生长。这一特性使其在海洋磷循环中具有重要生态意义,同时为解析其耐低磷机制提供了新视角。

研究结论与意义
本研究首次系统揭示了条斑紫菜应对低磷胁迫的分子机制:碱性磷酸酶(PyALP)定位于细胞壁与质膜间的微环境,负责水解溶解有机磷(DOP),而高亲和力磷酸盐转运体(PyPHO89)则介导无机磷的跨膜转运,两者在 Myb 转录因子(如Py08914)的调控下协同作用,形成高效的磷获取系统。该研究不仅填补了条斑紫菜低磷响应机制的研究空白,也为海藻耐逆品种的遗传改良提供了关键靶点(如PyALPPyPHO89及其调控因子)。此外,研究发现条斑紫菜对 DOP 的广谱利用能力,为海洋生态系统中磷循环的调控机制提供了新见解,对缓解近海养殖区磷资源短缺问题具有重要指导意义。

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