ARID1A沉默通过上调miR-652/ZFAND5轴促进香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞恶性转化

为解决香烟烟雾（CSE）诱导肺癌的分子机制问题，温州医科大学附属温州市中心医院团队开展ARID1A/miR-652/ZFAND5通路研究，发现CSE通过ARID1A启动子甲基化沉默上调miR-652，靶向抑制ZFAND5蛋白表达，加速支气管上皮细胞（HBE）恶性转化。该研究揭示了表观遗传调控在肺癌早期发生中的关键作用，为吸烟相关肺癌防治提供新靶点。

　　

香烟烟雾是肺癌的主要诱因之一，但其诱导正常支气管上皮细胞恶性转化的分子机制尚未完全阐明。微小RNA（miRNA）作为基因表达调控的关键分子，在肿瘤发生发展中扮演重要角色。温州医科大学附属温州市中心医院黄日胜、赵晓丹团队在《BMC Pulmonary Medicine》发表的研究，首次揭示了ARID1A/miR-652/ZFAND5轴在香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞（HBE）恶性转化中的核心作用。

研究采用的主要技术包括：甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）分析ARID1A启动子甲基化状态；双荧光素酶报告基因验证miR-652与ZFAND5 3'UTR结合；软琼脂克隆形成实验和Transwell迁移实验评估细胞恶性表型；利用GEO数据库筛选差异表达miRNA。

miR-652在CSE暴露的HBE细胞中被诱导上调
通过分析GEO数据集GSE175462和GSE107962，研究人员筛选出13个在肺腺癌和香烟烟雾暴露组织中共同差异表达的miRNA。qRT-PCR验证发现，只有miR-652在CSE处理的HBEC3-KT细胞中显著上调。

ARID1A表观遗传沉默导致miR-652上调
研究发现CSE处理导致ARID1A启动子区域高甲基化（经5-氮杂胞苷逆转验证），其mRNA表达下降。通过shRNA敲低和过表达实验证实，ARID1A负调控miR-652表达，且ARID1A过表达可抑制CSE诱导的miR-652上调。

miR-652促进CSE诱导的HBE细胞恶性转化
功能实验显示，过表达miR-652显著增强CSE处理的HBE细胞增殖、迁移和软琼脂克隆形成能力；而抑制miR-652则逆转这些恶性表型。这表明miR-652是CSE诱导HBE细胞转化的关键效应分子。

ZFAND5是miR-652的直接靶标
通过miRDB和TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验，证实ZFAND5 3'UTR存在miR-652结合位点。突变该位点后，miR-652对报告基因的抑制作用消失。Western blot显示miR-652仅下调ZFAND5蛋白而非mRNA水平，证实其通过翻译抑制发挥作用。

ZFAND5抑制HBE细胞恶性转化
CSE处理降低ZFAND5蛋白表达但不影响mRNA。敲低ZFAND5模拟miR-652过表达表型，促进细胞恶性转化；而过表达ZFAND5不仅能逆转CSE的促转化作用，还可抵消miR-652的促癌效应，证实ZFAND5是通路中的关键抑癌因子。

该研究首次阐明CSE通过ARID1A甲基化沉默→miR-652上调→ZFAND5蛋白抑制的级联反应促进支气管上皮细胞恶性转化的分子机制。创新性体现在：发现ARID1A对miR-652的表观遗传调控新功能；确立miR-652/ZFAND5轴在吸烟相关肺癌早期发生中的关键地位。研究为吸烟人群肺癌早期预警提供了miR-652等潜在生物标志物，并为开发靶向该通路的化学预防策略奠定理论基础。未来需在动物模型中验证ARID1A缺失是否足以诱发肺上皮细胞恶性转化，并探索临床样本中该通路的异常与吸烟史的相关性。