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在定量脂质组学中，归一化策略尚无统一标准，现有方法存在局限性。研究人员开发基于脂质提取物总磷含量（TPC）的归一化方法，结合 SFC-TIMS-MS/MS 与 ICP-OES/MS/MS，在秀丽隐杆线虫（C. elegans）和人血浆中验证，显著降低标准差，提升研究可靠性。
在生命科学研究的微观世界里，脂质作为细胞的重要组成部分，其代谢奥秘一直吸引着科学家们的目光。脂质组学旨在系统性分析生物体脂质谱，然而在定量研究中，样本间的差异如同迷雾，掩盖了真实的生物学信号。目前常用的归一化方法，如基于体积、蛋白质含量或 DNA 含量等，要么未能全面覆盖脂质特征，要么灵敏度不足，难以精准校正生物样本变异及分析流程中的误差。尤其是传统依赖比色法测定磷含量的方式，不仅可能遗漏部分磷脂类别，检测能力也存在瓶颈，使得脂质组学数据的可靠性与可比性面临挑战。如何拨开这层迷雾，找到一种更精准、普适的归一化策略，成为脂质组学领域亟待解决的关键问题。
为突破这一困境，来自国外研究机构的研究人员开展了一项具有创新性的研究。他们将目光聚焦于脂质提取物中的总磷含量（Total Phosphorus Content, TPC），试图以此为切入点，构建一种全新的归一化方法。这项研究成果发表在《Analytica Chimica Acta》，为脂质组学的标准化分析提供了新方向。
研究人员采用的核心技术方法包括超临界流体色谱 - 捕集离子淌度质谱联用技术（SFC-TIMS-MS/MS）和电感耦合等离子体光谱 / 质谱技术（ICP-OES/ICP-MS/MS）。通过 SFC-TIMS-MS/MS 对秀丽隐杆线虫（C. elegans）和人血浆中的（磷）脂质进行定量分析，同时利用硝酸消化脂质提取物，结合 ICP-OES/ICP-MS/MS 测定 TPC，将分子层面的脂质数据与元素分析的磷含量结合，实现样本归一化。
脂质定量与 TPC 测定方法的建立
研究首先在秀丽隐杆线虫模型中运用 SFC-TIMS-MS/MS 技术，对磷脂类物质如磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）、鞘磷脂（SM）等进行分离与定量。TIMS 技术的引入如同为脂质分析增添了 “精准筛”，通过离子淌度差异有效区分同分异构体，降低噪音干扰，提升检测灵敏度。在 TPC 测定方面，开发的硝酸消化法可彻底分解脂质，结合 ICP-OES/ICP-MS/MS，实现极低检测限（ICP-MS/MS 最低定量限 LOQ=0.2 μg L-1），显著优于传统比色法。
归一化策略的验证与对比
将 TPC 归一化策略与基于总蛋白含量（BCA 法）的归一化方法进行对比，结果显示，TPC 归一化后样本的标准差显著降低。以秀丽隐杆线虫为例，其生物样本因虫体计数误差和个体差异存在高变异性，归一化后磷脂类及非磷鞘脂类（如神经酰胺 Cer、己糖神经酰胺 HexCer）的浓度分布更集中于均值，且相较于蛋白归一化，TPC 法对磷脂酰胆碱（PC）等主要脂质类别的浓度差异揭示更清晰，避免了因蛋白含量与脂质代谢无直接关联导致的归一化偏差。
方法的普适性与优势
该方法在人血浆样本中同样表现出良好适用性，ICP-OES 与 ICP-MS/MS 测定结果高度一致，且 TPC 归一化无需依赖特定脂质类别假设，覆盖所有含磷脂质，克服了以往仅基于磷脂酰胆碱或鞘磷脂含量归一化的局限性。此外，ICP-OES 的低设备成本使其更易于推广，而 ICP-MS/MS 则适用于低浓度样本，二者结合为不同实验室条件提供了灵活选择。
研究结论与意义
这项研究首次将元素分析与分子脂质谱结合，建立了基于 TPC 的脂质组学归一化新策略。实验证明，该方法能有效校正生物变异与技术误差，提升数据可比性，尤其在秀丽隐杆线虫这类因个体微小、计数困难导致高样本差异的模型中优势显著。相较于传统归一化方法，TPC 策略通过全面反映磷脂组含量，为脂质代谢研究提供了更可靠的基准。其意义不仅在于优化了现有脂质组学流程，更在于为跨实验室数据整合、疾病相关脂质标志物筛选等提供了标准化工具，推动脂质组学向更精准、更具临床转化价值的方向迈进。未来，随着技术的进一步简化与普及，TPC 归一化有望成为脂质组学研究的核心方法之一，助力揭开更多脂质代谢相关疾病的神秘面纱。
