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为探究磷酸三 (2 - 氯异丙基) 酯（TCPP）的细胞毒性及致癌机制，研究人员以 HepG2 细胞为模型，发现 50 和 100 μM TCPP 可增加 ROS 生成，48 小时后 100 nM-100 μM TCPP 增强 caspase-3 活性，且 1-10 μM TCPP 可下调 CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1/CYP2B 表达及活性，提示其可能作为内分泌干扰物。
在现代工业社会，各类化学物质广泛应用于消费品中，阻燃剂便是其中一类重要成员。磷酸三 (2 - 氯异丙基) 酯（TCPP）作为一种有机磷阻燃剂（OPFRs），被大量用于塑料、纤维、泡沫等材料生产。然而，由于其未与聚合物化学结合，易迁移至环境中，目前已在水、土壤、空气中检测到 TCPP 的存在，且可在生物体内生物蓄积。尽管 TCPP 被怀疑具有致癌性和内分泌干扰作用，但其细胞毒性特性及潜在致癌机制却知之甚少。细胞色素 P450（CYP）酶家族在肝脏解毒过程中起着关键作用，参与外源性物质和内源性化合物的代谢，其功能异常可能导致毒素蓄积和代谢紊乱。因此，深入探究 TCPP 对 CYP 酶表达与活性的影响，对于揭示其毒理学机制及潜在健康风险至关重要。
波兰热舒夫信息技术与管理大学的研究人员开展了相关研究，旨在阐明 TCPP 对 HepG2 细胞（人肝癌细胞系，常用于研究肝脏解毒相关 CYP 酶）的影响，特别是对 CYP 酶表达和活性的作用。研究发现，TCPP 在 1-10 μM 浓度下，尽管可能激活芳香烃受体（AhR）通路，但却会降低 CYP1A1、CYP1A2 和 CYP1B1/CYP2B 的表达及活性，同时导致细胞内脂质积累增加，提示 TCPP 可能通过干扰 AhR 与 NRF2（核因子红细胞 2 相关因子 2）通路的相互作用，发挥内分泌干扰效应。该研究成果发表在《Biochemical and Biophysical Research Communications》，为评估 TCPP 的健康风险及揭示其毒理机制提供了重要科学依据。
研究主要采用了以下关键技术方法：通过乳酸脱氢酶（LDH）释放实验和刃天青还原实验检测细胞毒性和细胞活力；利用 H?DCFDA 荧光探针测定活性氧（ROS）生成；采用比色法检测 caspase-3 活性以评估细胞凋亡；运用实时定量 PCR（qPCR）检测基因表达水平；通过蛋白质免疫印迹（Western blot）分析蛋白表达；使用荧光底物法测定 CYP 酶活性（EROD、MROD、PROD 分别对应 CYP1A1、CYP1A2、CYP2B 活性）；采用油红 O（ORO）染色观察细胞内脂质积累情况；统计分析采用单因素方差分析（ANOVA）和 Dunnett 事后检验。
3.1 细胞毒性和细胞 viability 测试
通过 LDH 释放和刃天青还原实验发现，在 24 小时和 48 小时内，所有测试浓度（1 nM–500 μM）的 TCPP 均未诱导细胞毒性或改变 HepG2 细胞活力，表明低浓度 TCPP 短期内对细胞基本存活无显著影响。
3.2 ROS 产生
24 小时和 48 小时暴露实验显示，仅最高浓度的 200 和 500 μM TCPP 显著增加 ROS 生成，提示高浓度 TCPP 可能通过氧化应激损伤细胞，而环境相关低浓度下氧化应激效应有限。
3.3 Caspase-3 活性
48 小时暴露后，100 nM–500 μM TCPP 均可增强 caspase-3 活性，表明中低浓度 TCPP 长期作用可诱导细胞凋亡，这可能与其对 CYP 酶的抑制及信号通路干扰相关。
3.4 基因表达
24 小时暴露于 1 和 10 μM TCPP 显著下调 CYP1A1、CYP1A2、CYP2B6 mRNA 表达，同时 AhR mRNA 表达轻度降低，NF-κB mRNA 表达也呈浓度依赖性下降，提示 TCPP 可能通过转录水平调控抑制 CYP 酶相关基因。
3.5 蛋白质表达
24 小时时，1–100 μM TCPP 诱导 AhR 蛋白表达增加，同时 NRF2 蛋白显著升高，PPARγ 蛋白在低浓度下增加、高浓度下降低；CYP1B1 蛋白表达在所有测试浓度下均下降。48 小时后，AhR、NRF2、PPARγ 等蛋白表达呈现时间依赖性变化，进一步表明 TCPP 对信号通路的复杂调控。
3.6 细胞色素活性
48 小时时，1 和 10 μM TCPP 显著降低 EROD（CYP1A1 活性）、MROD（CYP1A2 活性）和 PROD（CYP2B 活性），与基因和蛋白表达结果一致，证实 TCPP 对 CYP 酶活性的功能性抑制。
3.7 ORO 染色
24 小时暴露于 10 μM TCPP 导致脂质积累增加 21%，且该效应可被 PPARγ 拮抗剂 GW9662 阻断，而 PPARγ 激动剂罗格列酮单独或联合使用时增强脂质积累，表明 TCPP 诱导的脂质代谢紊乱与 PPARγ 通路相关。
研究表明，TCPP 在低浓度（1–10 μM）下可通过潜在的 AhR 与 NRF2 通路互作，抑制 HepG2 细胞中 CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1/CYP2B 的表达及活性，同时通过激活 PPARγ 通路诱导脂质积累，提示其可能作为内分泌干扰物（EDC）发挥作用。CYP 酶在药物代谢、激素平衡和抗氧化防御中至关重要，其抑制可能导致毒素代谢受损和代谢稳态失衡，进而引发潜在健康风险，如癌症和代谢性疾病。此外，TCPP 的生物蓄积性和环境广泛存在性使其成为值得关注的化学污染物。该研究首次揭示了 TCPP 对 CYP 酶系统的抑制机制，为评估其毒理学效应提供了关键靶点和通路依据，有助于推动阻燃剂安全性评估及替代物研发，对环境毒理学和公共卫生领域具有重要意义。
