靶向Hedgehog与自噬通路协同抑制在急性髓系白血病细胞系中的抗肿瘤效应研究

本研究针对急性髓系白血病(AML)治疗中信号通路异常和耐药性难题，探索了Hedgehog(Hh)通路抑制剂GANT61与自噬抑制剂(如NH4Cl、CQ、nocodazole)的协同作用。通过MTT法证实双通路抑制可显著降低MOLM-13和CMK细胞活力，诱导G0/G1期阻滞，并上调LC3B-II表达，为AML靶向治疗提供了新策略。

　　

急性髓系白血病(AML)作为造血系统恶性疾病，其治疗困境始终困扰着医学界。尽管化疗、免疫治疗等手段不断进步，但染色体异常和信号通路紊乱导致的耐药性仍是难以逾越的障碍。其中，Hedgehog(Hh)通路这个在胚胎发育中调控细胞极性和增殖的古老通路，被发现与AML的肿瘤维持和耐药性密切相关。与此同时，自噬(autophagy)这把"双刃剑"——既能清除异常蛋白促进细胞死亡，又能通过"细胞回收"机制帮助肿瘤细胞存活——更让AML治疗策略的制定变得扑朔迷离。

为破解这一难题，来自土耳其科学技术研究委员会(TUBITAK)支持的研究团队在《Biochemical and Biophysical Research Communications》发表重要成果。研究人员创新性地采用双通路协同靶向策略，通过MTT细胞活力检测、细胞周期分析和蛋白表达测定等技术，系统评估了Hh通路抑制剂GANT61与三种自噬抑制剂(nocodazole、NH₄Cl和氯喹CQ)对MOLM-13和CMK两种AML细胞系的联合效应。

主要技术方法
研究采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术分析细胞周期，Western blot检测LC3B-II蛋白表达，qPCR测定GLI1基因水平。实验选用MOLM-13和CMK两种AML细胞系，分别代表不同的疾病亚型。

Chemicals
研究使用GANT61靶向抑制Hh通路关键转录因子GLI1，选用nocodazole阻断微管聚合抑制自噬体形成，NH₄Cl和CQ通过调节溶酶体pH值干扰自噬体-溶酶体融合。

The effect of autophagy manipulation on the proliferation of MOLM-13 and CMK AML cells
单独使用自噬抑制剂时，三种药物均显著抑制细胞增殖，其中nocodazole效果最显著。特别值得注意的是，nocodazole处理导致LC3B-II/LC3B-I比值升高，提示自噬流受阻。

Discussion
双通路抑制展现出显著协同效应：GANT61与自噬抑制剂联用使细胞活力降低程度远超单药处理。机制上，联合处理显著下调GLI1表达，同时在MOLM-13中诱导G0/G1期阻滞，但在CMK中未观察到此现象，提示细胞系特异性反应。

Conclusion
该研究首次证实Hh与自噬通路在AML中存在功能性交互。双靶向策略通过下调GLI1表达和干扰自噬流发挥协同抗白血病效应，其中nocodazole与GANT61组合最具潜力。研究为克服AML耐药性提供了新思路，特别是针对不同亚型AML的精准治疗策略开发具有重要指导意义。

Ethical approval
本研究未涉及人类或动物实验。

Funding
研究获土耳其TUBITAK 216S319项目资助。

这项研究的重要意义在于：首次系统阐明Hh-自噬轴在AML中的调控网络，突破传统单靶点治疗的局限性，为开发基于通路交互特性的联合治疗方案奠定理论基础。特别是发现不同AML细胞系对联合治疗的差异性反应，提示未来临床应用中需考虑AML的分子分型，真正实现个体化治疗。