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为探究沃尔巴克氏体（Wolbachia）表面蛋白（WSP）的免疫原性等，研究人员对马来丝虫（B. malayi）和彭亨丝虫（B. pahangi）内共生菌的wsp基因开展研究。发现其属 D 超群、序列高度保守，有保守抗原配体，为相关诊断和疫苗开发提供基础。
在生命科学和医学领域，丝虫病作为由丝虫寄生引发的一类重要寄生虫病，其病原体与内共生细菌的相互作用一直是研究热点。沃尔巴克氏体（
Wolbachia）作为广泛存在于节肢动物和丝虫体内的胞内共生菌，不仅对宿主的生殖发育至关重要，还与宿主的免疫反应密切相关。然而，关于丝虫体内沃尔巴克氏体表面蛋白（WSP）的遗传多样性、进化关系及其免疫原性，尤其是在泰国地区的马来丝虫（
Brugia malayi）和彭亨丝虫（
Brugia pahangi）中的具体情况，此前研究仍存在诸多空白。例如，传统形态学方法对微丝蚴的鉴定存在困难，基于其他基因的分子研究虽有开展，但针对
wsp基因的多样性分析及免疫原性研究尚不充分，而这些信息对于开发更有效的诊断工具和疫苗至关重要。
为填补这些研究空白，来自泰国研究机构的研究人员开展了相关研究。他们聚焦于马来丝虫和彭亨丝虫内共生沃尔巴克氏体的wsp基因，深入探究其遗传多样性、系统发育关系及免疫原性潜力，相关研究成果发表在《Current Research in Parasitology 》。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：首先，从泰国曼谷、春武里和罗勇等省份的动物医院采集 54 份犬类血液样本，通过显微镜观察、PCR 扩增细胞色素 c 氧化酶亚基 1（cox1）基因和 16S rRNA 基因，确认微丝蚴感染情况及沃尔巴克氏体的存在，并筛选出单一感染样本。随后，利用 PCR 技术扩增wsp基因，将扩增产物克隆至 pJET 1.2 载体并转化至大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α 细胞，进行测序。通过生物信息学方法，包括 ClustalW 多序列比对、MEGA 软件的最大似然法系统发育分析、DnaSP 的遗传多样性和单倍型分析，以及 VaxiJen v2.0 和免疫表位数据库（IEDB）对 B 细胞和 T 细胞表位进行预测。
3.1 分子克隆、系统发育分析及wsp基因相似性
通过 PCR 成功扩增并克隆了马来丝虫和彭亨丝虫内共生沃尔巴克氏体的wsp基因，获得的部分序列分别为 723 bp 和 615 bp，对应 240 和 205 个氨基酸残基。BLAST 分析证实了序列身份，多序列比对显示两者在 122 位均为甘氨酸（G），由不同同义密码子编码。系统发育分析表明，两者的wsp序列均聚类于 D 超群，与班氏丝虫（Wuchereria bancrofti）等其他丝虫的沃尔巴克氏体聚为一支，且序列高度保守，种内序列一致性达 99–100%，与国际分离株的相似性在 58.5–100% 之间。
3.2 单倍型多样性
结合新获得的序列和 GenBank 中的数据，共鉴定出 13 个不同单倍型。泰国的马来丝虫和彭亨丝虫分离株均属于 D 超群，其单倍型分别与美国等地的相关序列聚类。泰国境内的样本单倍型多样性较低，而全球范围内的样本显示出较高的单倍型和核苷酸多样性，表明wsp基因在不同地理区域存在一定的遗传变异。
3.3 B 细胞和 T 细胞表位分析
抗原性预测显示，马来丝虫和彭亨丝虫的 WSP 蛋白均具有较高的免疫原性。线性 B 细胞表位预测发现多个高度保守的氨基酸区域，不同算法预测结果显示出重叠的表位区域，提示这些区域可能是抗体结合的潜在位点。构象表位预测与线性表位结果一致。T 细胞表位预测显示，马来丝虫和彭亨丝虫分别有 8 个和 6 个具有 MHC I 类分子结合潜力的肽段，其中 VIADQKHGF 为两者共有的抗原配体，与犬白细胞抗原（DLA）等位基因结合。此外，马来丝虫中鉴定出一个保守的 ALVMLLSLSNSAFSD 肽段，可与人类白细胞抗原（HLA）II 类分子（HLA-DRB104:04 和 HLA-DRB104:01）结合。
研究结论表明，马来丝虫和彭亨丝虫内共生沃尔巴克氏体的wsp基因高度保守，均属于 D 超群，具有密切的进化关系。免疫信息学分析揭示了多个保守的 B 细胞和 T 细胞表位，表明 WSP 蛋白具有较强的免疫原性。这些发现为深入了解丝虫内共生沃尔巴克氏体的遗传多样性、进化关系及免疫原性提供了重要依据，特别是鉴定出的保守免疫原性表位，为开发针对丝虫病的新型血清诊断工具和靶向疫苗奠定了基础。此外，研究结果还提示，WSP 蛋白可能在宿主 - 共生菌相互作用中发挥关键作用，其保守区域和变异区域的功能差异值得进一步深入研究，以全面揭示沃尔巴克氏体在丝虫病发生发展中的作用机制。
