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针对 Pierson 泛菌（P. piersonii）现有鉴定方法耗时、MALDI-TOF 数据库缺失及 16S rRNA 测序特异性不足等问题，研究人员开发其实时荧光定量 PCR 检测方法，靶向苹果酸脱氢酶基因（mdh）。结果显示该法特异性强、灵敏度高，为临床和航天微生物监测提供新工具。
在微生物的世界里，隐藏着许多威胁人类健康的 “神秘杀手”，Pierson 泛菌（Pantoea piersonii）便是其中之一。这种最初在国际空间站（ISS）被分离出的新型细菌，如今已悄然入侵临床环境，引发从败血症到脑膜炎等多种感染。然而，其鉴定一直是个棘手难题：传统培养结合全基因组测序耗时费力，MALDI-TOF 质谱数据库中缺乏其特征图谱，16S rRNA 测序也难以将它与近缘菌区分。随着临床病例增多，无论是航天场景下的微生物监测，还是医院中的快速诊断，都亟需一种能精准识别它的 “火眼金睛”。
为破解这一困局，来自国外研究机构的研究人员开展了一项关键研究。他们聚焦于开发一种快速、特异的检测方法，最终成功设计并验证了一种针对 Pierson 泛菌的实时荧光定量 PCR（real-time PCR）检测法，相关成果发表在《Diagnostic Microbiology and Infectious Disease》。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：首先通过比较基因组分析，从 Pierson 泛菌的全基因组序列中筛选出苹果酸脱氢酶基因（malate dehydrogenase gene，mdh）作为特异性靶点；然后设计了靶向该基因的引物和 TaqMan 探针，并构建了内部扩增控制（IAC）体系以排除假阴性；接着利用 Qiagen DNeasy 试剂盒提取细菌 DNA，在 Roche LightCycler? 480 平台上进行实时 PCR 反应，反应条件经过优化，包括预变性、循环参数等；最后通过分析特异性、灵敏度及临床样本验证检测方法的性能，实验中使用了来自国际空间站、临床样本等多种来源的菌株作为测试对象。
3.1 检测方法特异性
研究人员测试了 44 株 Pierson 泛菌分离株，结果显示仅该菌 DNA 产生阳性信号，而包括近缘菌 Pantoea septica 等在内的 20 余种非目标微生物均未出现交叉反应。这表明该实时 PCR 检测法能精准识别 Pierson 泛菌，不受其他微生物干扰。
3.2 检测方法排他性
在排他性实验中，即使使用高浓度的近缘菌 DNA 进行测试，检测结果仍为阴性，且内部扩增控制均正常扩增，排除了反应抑制的可能性。进一步验证了该方法对 Pierson 泛菌的特异性识别能力，确保检测结果的可靠性。
3.3 检测方法分析灵敏度
通过对 Pierson 泛菌菌株 IIIF1SW-P2T的基因组 DNA 进行系列稀释，结合 Probit 分析（95% 置信区间），确定该检测方法的分析灵敏度为每反应 2.7 个靶标拷贝，实验显示检测下限在 1.96 至 6.2 个拷贝之间，表明其具有极高的灵敏度，能检测到极低浓度的目标 DNA。
3.4 检测方法验证
对来自国际空间站的 43 株 Pierson 泛菌分离株和 10 株临床分离株的测试结果显示，所有样本均能产生扩增曲线，且与其他临床分离的 Pantoea 属菌种无交叉反应。这证实了该检测方法不仅适用于航天环境中 Pierson 泛菌的监测，在临床样本检测中也能准确识别该菌，具有广泛的适用性。
研究结论表明，这项研究成功开发了首个针对 Pierson 泛菌的实时 PCR 检测方法，其靶向的 mdh 基因在该菌与近缘菌间存在显著序列差异（77-89% 同源性），确保了检测的特异性。该方法检测限低至约 3 个拷贝，检测时间约 40 分钟，兼具灵敏度与时效性，且在航天和临床样本中均表现出色。
讨论指出，Pierson 泛菌的临床威胁因易被误判为 P. septica 而可能被低估，其携带的耐药基因和毒力因子更凸显快速诊断的必要性。该检测方法为临床精准治疗提供了关键工具，可避免因误诊导致的抗生素滥用；在航天领域，有助于实时监测空间站微生物污染，保障宇航员健康与任务安全。尽管目前需从纯化培养物中提取 DNA，未来若结合免提取技术和等温扩增，有望进一步缩短检测时间，拓展其在资源有限环境中的应用。这项研究不仅填补了 Pierson 泛菌检测的技术空白，更为新型病原体的分子诊断提供了重要参考范式。
