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为建立选择性测定吡托布鲁替尼（Pirtobrutinib）及其降解产物的方法，研究人员开展 RP-HPLC 方法开发与强制降解试验。结果显示方法线性、精密度符合 ICH 要求，明确药物在酸、碱等条件下降解情况，LC-MS 鉴定降解产物结构，为药物稳定性研究提供新工具。
背景：吡托布鲁替尼（Pirtobrutinib）是一种新型非共价布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂，用于治疗复发 / 难治性套细胞淋巴瘤和 B 细胞白血病患者，其作用机制涉及结合并抑制 BTK。
目的：本研究主要目标是建立一种选择性强、易用、准确的液相色谱方法（RP-HPLC），用于定量测定吡托布鲁替尼及其降解产物，进而深入了解药物的降解行为。
方法：采用等度洗脱模式，以乙腈和缓冲溶液（0.1% 磷酸）按 50:50 混合作为流动相，配备 PDA 检测器的高效液相色谱系统和 X-Bridge 苯基柱（150×4.6mm，3.5μm），流速为 1.0ml/min，实现了良好的色谱分离。检测在 219nm 波长下进行，发现保留时间为 2.271 分钟。通过进行强制降解试验以确定药物的降解特性和稳定性，从而开发了 RP-HPLC 方法。利用 LC-MS 阐明了降解产物的化学结构，并提出了其碎裂机制。
结果：所建议的方法在 25-150%（2.5 至 15μg/mL）浓度范围内表现出线性，相关系数为 0.9999。系统精密度（以 % RSD=0.49 衡量）和方法精密度（以 % RSD=0.86 衡量）均在 ICH 指南设定的可接受范围内，系统精密度的 % RSD 小于 1%，方法精密度的 % RSD 小于 2%。检测限（LOD）为 0.3μg/mL，定量限（LOQ）为 1μg/mL。吡托布鲁替尼在 ICH Q1（R2）指南规定的条件下进行了严格的强制降解试验。吡托布鲁替尼在酸性、碱性、过氧化物和热条件下主要发生分解，在还原、光解和水解条件下保持稳定。通过 LC-MS 分析，鉴定了所得降解副产物的化学结构，并提出了其碎裂途径。
结论：本研究深入了解了吡托布鲁替尼的降解行为。吡托布鲁替尼在还原、光解和水解条件下稳定，但在酸性、碱性、过氧化物和热环境中更易降解。降解产物被表征为 4 - 氨基甲酰基 - 5 - 氯 - 3 (4-((5 - 氟 - 2 - 甲氧基苯甲酰胺基) 甲基) 苯基)-4,5 - 二氢 - 1H - 吡唑 - 5 - 铵（酸性杂质，DP1）、N-(4-(4,5 - 二氨基 - 1H - 吡唑 - 3 - 基) 苄基)-5 - 氟 - 2 - 羟基苯甲酰胺（碱性杂质，DP2）、5 - 氨基 - 3-(4-((s - 氟 - 2 - 甲氧基苯甲酰胺基) 甲基))-4,5 - 二氢 - 1H - 吡唑 - 5 - 铵（过氧化物杂质，DP3）和 N-(4-(4 - 乙酰基 - 5 - 氨基 - 4,5 - 二氢 - 1H - 吡唑 - 3 - 基) 苄基)-5 - 氟 - 2 - 甲氧基苯甲酰胺化合物与 λ1- 氧化烷（1:1）（热杂质，DP4），并提出了它们的碎裂途径。本研究首次报道了定量测定吡托布鲁替尼的方法，确保了对这种新型 BTK 抑制剂及其降解产物的精确定量。该方法增强的灵敏度和法规合规性确保了其在吡托布鲁替尼定量中的一致应用。
