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为建立快速精准测定肉豆蔻（Myristica fragrans）种子粉提取物中丁香酚含量的方法，研究人员开发并验证一种反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，采用中心复合设计（FCCD）优化流动相组成等变量。结果显示方法线性范围 6.25-100 μg/mL（R2=0.999），抗氧化活性在己烷溶剂中最高，为丁香酚分析提供可靠工具。
背景：开发并验证一种快速、精准、灵敏且稳健的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，用于测定肉豆蔻（Myristica fragrans）种子粉提取物中的丁香酚含量。
目的：利用化学计量学方法构建耐用且明确的色谱分析方法。
方法：采用中心复合设计（FCCD）考察乙腈比例、流速等方法变量对稳健性的影响，借助 Design Expert 12.0.1.0 软件进行优化。监测各因素对种子粉提取物中丁香酚回收率的影响。优化后的流动相为甲醇 - 水 - 乙腈（10:40:50, v/v/v），使用 Symmetry? C18 柱（5 μm, 3.9×150 mm），流速 1 mL/min，在最大吸收波长 272 nm 处测定丁香酚含量。
结果：方法验证涵盖选择性、线性、精密度、准确度、检测限（LOD）和定量限（LOQ）。丁香酚在 6.25-100 μg/mL 浓度范围内呈线性（R2=0.999），变异系数小于 1%，回收率为 96.80%-99.56%，LOD 和 LOQ 分别为 1.97 μg/mL 和 6.25 μg/mL。日内和日间变异系数分别为 1.81-1.91 和 1.92-1.57。采用 DPPH 法测定种子粉提取物在五种不同溶剂中的抗氧化活性（AA），以抗坏血酸为对照计算 AA 百分比，其中己烷溶剂中 AA 百分比最高。
结论：该验证方法具有高度稳健性，可用于丁香酚制剂分析，且己烷溶剂中抗氧化活性表现最佳。
