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为解决莱姆病（LB）诊断中 Liaison Borrelia IgG 免疫分析可能因钩状效应（Prozone）导致假低值结果及误诊问题，研究人员对 5639 份样本展开研究，发现 26.7% 样本存在钩状效应，确定 98.7 AU/mL 稀释阈值可有效检测该效应，为临床准确诊断提供依据。
莱姆病（Lyme borreliosis）是一种由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi sensu lato, Bbsl）感染引起的全身性蜱传疾病，其诊断高度依赖临床症状与血清学检测。在血清学分析中，高滴度 IgG 抗体常与晚期症状如关节炎、慢性萎缩性肢端皮炎及部分晚期神经疏螺旋体病相关。然而，具有宽检测范围的免疫分析方法可能出现钩状效应（Prozone effect），即高浓度分析物（抗体或抗原）会饱和结合物和检测抗体，抑制免疫复合物形成，导致假低值结果，进而引发漏诊或误诊。目前，市售检测试剂如 Liaison Borrelia IgG 化学发光免疫分析（CLIA）虽被广泛使用，但厂商仅建议对 IgG>240 AU/mL 的样本进行稀释，而钩状效应的实际影响范围及合理稀释阈值仍不明确。在此背景下，瑞典卡尔斯塔德医院（Karlstad Hospital）的研究团队开展了相关研究，旨在明确该检测方法中高剂量钩状效应的发生情况及影响范围，并优化稀释策略以避免误诊，研究成果发表在《European Journal of Clinical Microbiology》。
为实现研究目标，研究人员对 2021 年 4 月 14 日至 2023 年 2 月 28 日期间卡尔斯塔德医院临床微生物科检测的 5639 份 Bbsl 抗体样本进行筛选。纳入标准为 IgG≥75 AU/mL 或 IgG<75 AU/mL 但伴可检测 IgM 的样本，共 389 份（6.8%）。其中，127 份未稀释样本 IgG>240 AU/mL（按厂商建议需稀释）被排除，最终 262 份样本进入统计分析。研究采用高斯混合模型（GMM）对稀释前后反应性变化进行聚类，区分存在与不存在钩状效应的样本，并通过分段线性回归（segmented linear regression）分析反应性变化的断点，同时计算 5th 百分位数（识别 95% 钩状效应样本）和 95th 百分位数（避免 95% 过度稀释）。
研究结果
- 钩状效应发生率：在 262 份稀释样本中，70 份（26.7%）被归为钩状效应组，占纳入样本的 18%、总筛查样本的 1.2%。钩状效应样本的未稀释 IgG 范围为 77.8-239 AU/mL，稀释后反应性显著升高，最低钩状效应信号对应的未稀释 IgG 为 77.8 AU/mL，稀释后升至 1579 AU/mL。
- 稀释阈值确定：钩状效应组的 5th 百分位数为 98.7 AU/mL，即未稀释 IgG>98.7 AU/mL 时，95% 样本存在钩状效应；过度稀释样本的 95th 百分位数为 96.0 AU/mL，提示未稀释 IgG<96 AU/mL 时过度稀释风险显著增加。分段线性回归显示反应性变化的断点为 48 AU/mL（置信区间 48-108 AU/mL），但该值因过度稀释样本在此区间外仍有分布，故不适合作为阈值。
- 特殊现象：研究中观察到 1 例双重钩状效应，未稀释 IgG 为 119.5 AU/mL，经 1:10 和 1:50 稀释后分别升至 1979 AU/mL 和 2710 AU/mL，表明稀释样本仍可能因高反应性再次触发钩状效应。
讨论与结论
本研究首次系统揭示了 Liaison Borrelia IgG 检测中的钩状效应问题。数据表明，传统厂商建议的 240 AU/mL 稀释阈值明显滞后，高达 26.7% 的中高滴度样本（IgG>98.7 AU/mL）因未被稀释而可能漏诊晚期莱姆病。钩状效应不仅影响血清检测，还可能干扰脑脊液（CSF）样本的鞘内抗体指数计算，导致神经疏螺旋体病的误诊（假阴性或假阳性）。研究提出的 98.7 AU/mL 稀释阈值可有效识别 95% 的钩状效应样本，同时避免 95% 以上的过度稀释，为临床实验室优化检测流程提供了关键依据。此外，研究提示即使样本 IgG 低于该阈值，若临床高度怀疑晚期莱姆病，仍需谨慎解读结果，必要时进行稀释复检。
该研究的局限性在于仅针对血清样本，脑脊液中钩状效应的表现及其他 Bbsl 抗体检测方法（如 IgM）是否受影响仍需进一步验证。尽管如此，其建立的稀释策略为提高莱姆病诊断准确性迈出了重要一步，尤其对依赖高灵敏度免疫分析的临床场景具有直接指导意义。未来研究需扩展至其他样本类型及检测平台，以全面评估钩状效应的普遍性及解决方案的适用性。
