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为解决药物分析中环境安全与杂质检测难题，研究人员开发绿色高效液相色谱（HPLC）法，用于同时测定美索巴莫（MET）、阿司匹林（ASP）及其杂质愈创甘油醚（GUF）、水杨酸（SA）。该方法线性范围宽、灵敏度高，经多种绿色评估验证，对药品质量控制和临床检测具重要意义。
在药物研发与质量控制领域，准确检测药品中的主成分及其相关杂质是保障用药安全的关键环节。美索巴莫（Methocarbamol, MET）作为肌肉松弛剂，阿司匹林（Aspirin, ASP）作为常用镇痛解热药，二者常联合制成复方制剂用于缓解肌肉痉挛。然而，其合成过程中可能引入愈创甘油醚（Guaifenesin, GUF）和水杨酸（Salicylic Acid, SA）等杂质，这些杂质不仅可能影响药物稳定性，还可能引发不良反应。此外，传统的药物分析方法往往依赖有毒有机溶剂，对环境和操作人员健康构成威胁，因此开发环保、高效的分析方法成为迫切需求。
为应对上述挑战，来自 Modern University for Technology and Information（埃及）和 Nahda University in Beni-Suef（埃及）的研究人员开展了相关研究。他们开发了一种绿色高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）方法，实现了对 MET、ASP 及其杂质 GUF、SA 的同时分离和定量，并通过分子对接技术探讨了化合物与固定相的相互作用，还对方法的绿色性进行了系统评估。该研究成果发表在《BMC Chemistry》，为药物分析领域提供了兼具准确性与环保性的新方案。
研究采用的关键技术方法包括：
- 高效液相色谱法（HPLC）：使用 X-Bridge C8反相柱（4.6×250 mm, 5 μm），以甲醇：水: 三乙胺（70:30, 0.1% 体积比）为流动相，调节 pH 至 3.00，流速 2.00 mL/min，检测波长 254 nm，实现了四种化合物的快速分离。
- 分子对接技术：利用 Molecular Operating Environment 软件，模拟 MET、ASP、GUF、SA 与 C8固定相的相互作用，预测洗脱顺序并验证实验结果。
- 绿色性评估工具：采用 Analytical Eco-Scale、AGREE 及 Whiteness assessment（RGB 分析），从环境影响、方法性能等多维度评估方法的绿色属性。
研究结果
1. 方法开发与优化
通过筛选不同色谱柱和流动相组成，最终确定 X-Bridge C8柱搭配甲醇 - 水 - 三乙胺体系为最优条件。该条件下，四种化合物在 10 分钟内实现基线分离，保留时间分别为 GUF（3.70 min）、MET（4.20 min）、ASP（4.50 min）、SA（6.50 min），系统适用性参数（如分辨率 RS>1.25、对称因子 T≈1）均符合药典要求，表明方法稳定性和分离效率良好。
2. 方法验证
- 线性范围：GUF（0.30-50.00 μg/mL）、MET（1.00-300.00 μg/mL）、ASP（10.00-500.00 μg/mL）、SA（0.10-50.00 μg/mL），相关系数（r）均≥0.9997。
- 准确性与精密度：加样回收率为 99.69%-101.07%，日内和日间精密度的相对标准偏差（% RSD）均小于 1.57%，显示方法可靠。
- 检测限（LOD）与定量限（LOQ）：LOD 为 0.03-5.11 μg/mL，LOQ 为 0.09-9.27 μg/mL，灵敏度满足痕量杂质检测需求。
3. 实际样品应用
- ** pharmaceutical formulation 分析 **：在 Robaxisal extra strength? 片剂中，MET 和 ASP 的含量测定结果与标示量一致，加样回收率验证表明辅料无干扰。
- ** spiked human plasma 分析 **：无需复杂前处理，直接进样即可准确测定血浆中 MET 和 ASP 浓度，回收率达 99.69%-101.07%，适用于药代动力学研究。
4. 分子对接与绿色性评估
分子对接结果显示，MET 与固定相通过疏水作用结合，GUF 因极性较高优先洗脱；ASP 与固定相作用较弱，SA 因含酚羟基极性最强，洗脱顺序与实验结果一致。绿色性评估显示，该方法在 Analytical Eco-Scale 中得分 72 分，AGREE 评分为 0.75，Whiteness 值达 99.7%，均优于已报道方法，证明其环境友好性。
研究结论与意义
本研究开发的绿色 HPLC 方法实现了 MET、ASP 及其杂质的高效分离与定量，具有线性范围宽、灵敏度高、分析时间短等优势，且通过分子对接揭示了分离机制。绿色性评估表明该方法符合现代分析化学的环保要求，可显著减少有机溶剂使用，降低实验成本和环境风险。该方法不仅适用于药品质量控制（QC）实验室的常规分析，还可用于人体血浆中药物浓度监测，为临床合理用药提供技术支持。此外，研究中结合计算模拟与实验验证的策略，为色谱方法开发提供了新思路，有望推动绿色分析化学在药物领域的广泛应用。
