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本综述聚焦实时荧光定量 PCR（qPCR）在利什曼病诊断中的应用，分析 43 项研究发现，侵袭性样本敏感性（>90%）高于非侵袭性（<90%），但两者特异性均超 85%。kDNA 微环是最有潜力分子靶点，TaqMan 探针略优于 SYBR Green，呼吁加强非侵入性技术研究。
利什曼病是由利什曼原虫属（
Leishmania）原生动物寄生虫引起的疾病，被列为被忽视的热带病（NTDs），在全球四个生态流行病学区域（美洲、东非、北非、东南亚和西亚）构成重大健康问题。其临床表现多样，从局部皮肤型到可能致命的内脏型，后者若未正确诊断和治疗死亡率高。当前诊断技术包括组织样本中寄生虫的直接显微镜鉴定、体外培养、血清学方法（如 ELISA、间接免疫荧光 [IFI] 以及基于 rK39 和 rK28 等抗原的快速检测）和核酸检测等。实时荧光定量 PCR（qPCR）作为一种基于核酸的技术，具有高灵敏度和特异性，在检测不同临床样本中的低寄生虫负荷方面有价值，但需要高质量样本和专用设备。
本系统综述遵循 PRISMA 指南，在 PROSPERO 注册（注册号：CRD42023413283），旨在探讨 qPCR 在利什曼病分子诊断中的现有方案，为通用或物种特异性应用选择或开发最佳方案提供参考，以满足区域或全球诊断需求。研究检索了 2011 年 1 月至 2023 年 7 月 PubMed、LILACS 等数据库中评估 qPCR 对内脏利什曼病（VL）、皮肤利什曼病（CL）和黑热病后皮肤利什曼病（PKDL）诊断性能的研究，最终纳入 43 项研究，涉及全球不同地区，多数为 VL 研究（26 项），其次是 CL（19 项）和 PKDL（6 项）。
在研究组和临床样本方面，VL 研究对象包括狗（16 项）、人类（13 项）和猫（1 项），犬 VL（CVL）使用血液、淋巴结、骨髓等样本，人类 VL 样本有血液、骨髓等；CL 研究多数针对人类（18 项），使用皮肤活检、病变拭子等样本；PKDL 研究均使用人类样本，包括血液、皮肤活检和病变 aspirates。
qPCR 的敏感性和特异性因样本类型而异。VL 侵袭性样本的总体敏感性和特异性分别为 90.07%（95% CI：88.7–91.3%）和 99.61%（95% CI：99.39–99.76%），非侵袭性样本分别为 86.06%（96% CI：80.51–90.26%）和 100%；CL 侵袭性样本敏感性 87.22%（96% CI：85.12–89.06%）、特异性 87.16%（96% CI：83.09–90.36%），非侵袭性样本敏感性 70.14%（96% CI：66.7–73.37%）、特异性 95.57%（96% CI：91.14–97.84%）；PKDL 侵袭性样本敏感性 82.69%（96% CI：77.63–86.81%）、特异性 99.64%（96% CI：97.98–99.94%），非侵袭性样本均为 100%。
分子靶点方面，多数研究（26 项）使用动质体 DNA 微环（kDNA 微环），其他靶点包括重复 DNA 序列（REPL）、小亚基核糖体 RNA（SSU rRNA）基因、内转录间隔区（ITS1 和 ITS2）等。qPCR 方法中，VL 研究 16 项用 TaqMan 探针，11 项用 SYBR Green；CL 研究 10 项用 TaqMan，10 项用 SYBR Green；PKDL 研究 3 项用 SYBR Green，3 项用 TaqMan。
尽管 qPCR 有潜力，但在样本采集协议、DNA 提取方法、标准化或质量控制（如宿主靶点的使用）等方面缺乏共识。kDNA 因高拷贝数是敏感靶点，TaqMan 探针特异性高，SYBR Green 经适当标准化也可准确。非侵入性样本虽特异性高，但可能因寄生虫浓度低影响敏感性，其与 qPCR 结合有潜力成为大规模应用的有效替代方案。未来需制定共识协议，改进 qPCR 方法，通过包容性研究解决区域差异，以提高全球诊断适用性。
