编辑推荐：
为探究牙髓细胞源性小细胞外囊泡（DPCs-sEVs）在牙髓再生中的作用，研究人员对比矿物三氧化物凝聚体（MTA），分析其对牙髓细胞（DPCs）增殖、迁移及成骨 / 成牙基因表达的影响。发现 DPCs-sEVs 与 MTA 联用效果更佳，为再生牙髓治疗提供新方向。
牙齿内部的牙髓组织如同 “牙齿的生命线”，不仅赋予牙齿感知冷热的能力，还承担着修复受损牙本质的重任。然而，当牙髓因龋齿、外伤等暴露时，其有限的再生能力往往难以实现有效修复。传统的盖髓材料如氢氧化钙 [Ca (OH)2] 虽应用广泛，却存在易降解、密封性差等缺陷，而矿物三氧化物凝聚体（MTA）虽疗效更优，却面临操作复杂、成本高昂的挑战。如何突破这些瓶颈，找到更高效的牙髓再生策略，成为口腔医学领域亟待解决的难题。
来自 Mansoura 大学的研究团队瞄准这一困境，开展了 “牙髓细胞来源小细胞外囊泡（DPCs-sEVs）对牙髓细胞特性和行为影响” 的研究。他们假设 DPCs-sEVs 这种兼具免疫调节与组织修复能力的纳米级囊泡，可能成为细胞治疗的替代方案。通过体外实验，研究人员系统分析了 DPCs-sEVs 单独或联合 MTA 对牙髓细胞增殖、迁移及成骨 / 成牙基因表达的调控作用，相关成果发表在《BMC Oral Health》。
研究主要采用以下关键技术：
- 超离心技术：从大鼠牙髓细胞培养上清中分离 DPCs-sEVs；
- 流式细胞术（FC）、透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）：对 sEVs 进行表型、形态、粒径及浓度表征；
- MTT 法、Transwell 迁移实验：评估细胞增殖与迁移能力；
- 实时荧光定量 PCR（RT-PCR）：检测成骨 / 成牙相关基因（如 Dspp、Ocn、Col1、Runx2）的表达水平。
研究结果
1. DPCs-sEVs 的表征
通过超离心成功分离出 DPCs-sEVs，经 TEM 观察呈典型球形或椭圆形，粒径分布在 60-260 nm 之间，平均约 230 nm。NTA 显示其浓度为 6.2×107 颗粒 /mL，流式细胞术证实表达 sEVs 特异性标志物 CD9、HSP70，Western 印迹检测到 CD63、TSG101 等蛋白，表明分离的 sEVs 具有较高纯度。
2. 对牙髓细胞增殖的影响
MTT 结果显示，50 μg/mL DPCs-sEVs 单独处理可显著促进 DPCs 增殖，而与 0.2 mg/mL MTA 联用效果更优。培养 14 天时，联合组的细胞活力较对照组提升近 10 倍，表明两者具有协同促增殖作用。
3. 对牙髓细胞迁移的影响
Transwell 实验表明，MTA 单独处理组的细胞迁移能力优于 sEVs 组，而联合组迁移细胞数量（79.00±3.22）显著高于其他组，提示 DPCs-sEVs 与 MTA 联用可增强细胞向损伤部位的募集能力。
4. 对成骨 / 成牙基因表达的调控
RT-PCR 结果显示，联合组的牙本质涎磷蛋白（Dspp）、骨钙素（Ocn）、I 型胶原（Col1）及 Runx2 转录因子表达水平均显著高于单药组。其中，Dspp 表达量较对照组提升约 5 倍，表明两者联用可协同激活成牙本质分化通路。
结论与讨论
本研究证实，DPCs-sEVs 与 MTA 联合应用可显著增强牙髓细胞的增殖、迁移及成牙本质分化能力，为再生牙髓治疗提供了 “无细胞化” 新策略。sEVs 作为细胞间通讯的 “信使”，其携带的生物活性分子（如 miRNA、蛋白）可通过调控 AKT/ERK 等信号通路发挥作用，而 MTA 则通过提供碱性微环境及离子释放协同促进组织修复。
该研究突破了传统细胞治疗的局限性，为解决牙髓再生中材料生物相容性、操作复杂性等问题提供了新思路。未来若能在体内模型中验证其安全性与有效性，并开发标准化的 sEVs-MTA 复合制剂，有望推动牙髓再生技术从实验室走向临床，为保留天然牙髓活力、避免拔牙提供更优选择。研究结果不仅深化了对牙髓修复机制的理解，也为其他组织再生领域（如骨缺损修复）提供了跨学科借鉴。
