中国首次发现羊和山羊感染内罗毕羊病病毒（NSDV）的流行病学、病毒学及致病性研究

本研究首次在中国羊和山羊中鉴定出内罗毕羊病病毒（NSDV）感染，通过宏转录组测序揭示了病毒在脾脏组织中的高丰度存在，并分离出具有强致病性的病毒株。流行病学调查显示NSDV RNA阳性率4.1%，血清阳性率29.9%，证实该病毒在中国畜群中的流行。序列分析表明中国NSDV毒株与本地蜱虫分离株聚类，但明显区别于非洲和印度毒株，且存在遗传多样性。动物实验显示分离毒株可导致羊只高热、腹泻甚至死亡，凸显其跨境传播风险及防控必要性。

　　

ABSTRACT
内罗毕羊病病毒（NSDV）作为正内罗病毒属（Orthonairovirus）的重要蜱媒病原体，其引发的内罗毕羊病（NSD）在羊和山羊中致死率超过90%。本研究首次在中国羊和山羊脾脏组织中通过宏转录组测序发现NSDV，病毒载量显著。分子流行病学调查揭示4.1%的NSDV RNA检出率和29.9%的血清抗体阳性率，证实该病毒在中国畜群中的自然传播。

遗传特征与进化分析
NSDV毒株MZ-18的L、M、S片段分别编码RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）、糖蛋白前体（GPC）和核蛋白（N）。序列比对显示，MZ-18与中国蜱虫分离株TIGMIC_1和湖北株同源性最高（L片段98.1%，M片段96.5%），但与非洲肯尼亚株（708）和印度株（Ganjam G619）差异显著。系统发育树显示中国NSDV毒株形成独立分支，且进一步分为A、B两个亚群，其中B亚群又含三个亚支，反映中国境内NSDV的遗传多样性。

病毒分离与宿主谱
从感染脾脏样本中成功分离出NSDV，电镜观察显示直径80–100 nm的包膜病毒颗粒。免疫荧光证实病毒可在BHK-21-C13细胞中高效复制（TCID₅₀达10^6.151拷贝/μL），且能感染人源细胞系（A375、HepG2/C3A和Huh7），提示跨物种传播潜力。

动物致病性实验
4周龄羊接种MZ-18后2–3天出现高热（峰值42.0°C），4–6天发生血性腹泻，25%感染羊于8天内死亡。组织病理学显示脾脏白质淋巴细胞耗竭、肺肺泡壁增厚及回肠黏膜出血。qRT-PCR检测发现感染后4天脾脏病毒载量最高（10^6.151拷贝/mg），28天后仅淋巴组织残留低水平病毒RNA。

讨论与意义
研究首次证实中国羊群中存在NSDV自然感染，其传播媒介可能为广泛分布的长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）。血清学数据提示中国多省份存在隐性感染，而病毒在人源细胞中的复制能力警示其潜在公共卫生风险。尽管实验感染死亡率（25%）低于历史报告（90%），但病毒遗传多样性及跨境传播风险强调需建立主动监测体系，为NSD防控提供科学依据。

方法学亮点
研究采用宏转录组测序结合传统病毒分离技术，通过竞争性ELISA（基于NSDV-N蛋白）实现血清抗体检测，动物模型完整模拟了自然感染进程。电镜与免疫荧光技术直观呈现病毒形态及细胞内分布，为后续致病机制研究奠定基础。