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本文聚焦食油不动杆菌 DR1 在共代谢过程中对原油的降解机制。通过代谢组学发现,葡萄糖虽非其首选碳源,却可通过促进脂肪酸及低分子有机酸(如戊二酸、柠檬酸等)合成增强烃类代谢,揭示其在原油生物修复中的应用价值。
研究背景与目的
在烃污染土壤中,易代谢碳源的存在会引发碳分解代谢物阻遏(CCR),抑制烃降解菌活性,延缓生物修复进程。本研究以食油不动杆菌(Acinetobacter oleivorans)DR1 为对象,利用代谢组学和液相色谱 - 高分辨精确质谱技术,探究其在葡萄糖共代谢条件下对原油的降解机制及代谢响应,解析生物表面活性剂与葡萄糖对代谢路径的调控作用。
关键实验设计与结果
生物表面活性剂特性
DR1 在培养 144 小时时展现 50% 乳化活性,经薄层色谱(TLC)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)鉴定,其产生的生物表面活性剂为鼠李糖脂,特征官能团包括酯基(1,660 cm-1)、芳香环(1,535 cm-1)及羟基(3,417 cm-1)等,证实其通过降低界面张力增强烃类水溶性。
碳源对生长与降解的影响
在含原油的培养基中,DR1 优先利用烃类而非葡萄糖。单独原油(CO)或原油 + 生物表面活性剂(COB)条件下,菌体生长滞后期仅 3 小时,而含葡萄糖的培养基(如 CGB)滞后期延长至 7 小时,且葡萄糖存在时生长速率显著降低。然而,葡萄糖的添加使十二烷降解率提升 31%,三十烷提升 18%,表明其通过非生长代谢途径促进烃降解。
代谢组学与通路分析
主成分分析(PCA)显示,不同碳源条件下代谢物聚类差异显著,生物表面活性剂对代谢组影响较小,而葡萄糖显著改变代谢流向。偏最小二乘判别分析(PLS-DA)筛选出关键代谢物,如柠檬酸、海藻糖、葡萄糖酸等。在仅含原油的培养基中,生物素、谷胱甘肽氧化型及 16 - 羟基癸酸(棕榈酸前体)高度积累,与 β- 氧化和抗氧化应激相关;含葡萄糖的培养基中,柠檬酸、酒石酸、油酸等有机酸及脂肪酸合成通路代谢物显著增加,提示葡萄糖通过戊糖磷酸途径(PPP)和糖异生促进有机酸合成,进而增强烃链分解。
基因与代谢通路关联
基因组分析表明,DR1 缺乏葡萄糖激酶(Glk)基因,无法通过糖酵解途径代谢葡萄糖,而是依赖葡萄糖脱氢酶(Gcd)和葡萄糖酸激酶(IdnK)将葡萄糖转化为葡萄糖酸,经 PPP 进入代谢网络。同时,DR1 具备完整的烷烃氧化基因簇(如AlkB、AlkT、RubB),通过末端氧化途径将烷烃转化为脂肪酸,再经 β- 氧化进入三羧酸(TCA)循环。海藻糖合成基因(OtsA/B)的表达在烃降解过程中上调,其作为渗透保护剂可缓解氧化应激,增强菌体对烃类毒性的耐受性。
讨论与意义
本研究揭示 DR1 在共代谢中的独特策略:尽管葡萄糖因缺乏关键代谢酶而利用率低,但其通过诱导有机酸和脂肪酸合成,协同生物表面活性剂提升烃类生物可及性,绕过 CCR 效应。此外,糖异生途径的激活使 DR1 能够利用烃降解中间产物合成海藻糖,维持细胞内稳态。这些发现为优化生物修复策略提供了新视角,即通过添加非生长性碳源(如葡萄糖)调控代谢流向,增强难降解烃的清除效率。DR1 兼具产表面活性剂和高效烃降解能力,在污染土壤修复中具有广阔应用前景,未来可进一步探索其在复杂环境中的代谢工程优化潜力。