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为探究 PCSK9 在头颈癌（HNC）中的病理作用，研究人员利用 CRISPR-Cas9 敲除系统及药理学抑制，结合多数据库分析与多模型实验（如 CCK-8、Transwell 等）。发现其对 HNC 细胞增殖、凋亡及转移影响微弱，提示 PCSK9 为 HNC 乘客基因，为靶向治疗提供新视角。
在肿瘤研究的浩瀚海洋中，头颈癌（HNC）始终是一块难啃的 “硬骨头”。这类起源于头颈部黏膜上皮或唾液腺等组织的恶性肿瘤，每年夺走数十万人的生命，尽管治疗手段不断更新，其五年生存率却长期徘徊在 50% 左右，晚期患者预后更是堪忧。更棘手的是，作为占比 90% 的主要类型 —— 鳞状细胞癌（SCC）与具有独特混合细胞特征的黏液表皮样癌（MEC），在病理机制和治疗响应上仍有诸多未解之谜。寻找能精准反映病情、预测预后的生物标志物，成为突破治疗瓶颈的关键。
在癌症的基因网络中，驱动基因如同 “发动机” 推动肿瘤生长，而乘客基因则被视为基因组不稳定的 “副产品”，不直接参与肿瘤进程。但近年来，随着对肿瘤代谢依赖性的深入认知，与脂质代谢密切相关的前蛋白转化酶枯草溶菌素 /kexin9 型（PCSK9）基因进入研究者视野。在心血管领域，PCSK9 因调控低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）降解而成为降脂靶点，但其在肿瘤中异常表达的现象引发猜想：这个 “脂质调控者” 是否在癌症中扮演更复杂的角色？已有研究显示，PCSK9 在肝癌、结肠癌等中促进肿瘤进展，却在部分癌症中呈现矛盾作用，其在头颈癌中的角色更是迷雾重重。
为解开这一谜团，韩国研究人员开展了一项严谨的研究，相关成果发表在《Archives of Oral Biology》。
研究团队采用多维度研究策略：首先通过 GEO 和 UALCAN 数据库的计算机分析（in silico analysis），发现 PCSK9 在头颈癌组织中表达上调，提示其可能与肿瘤进展相关。为验证这一假设，研究者利用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术构建 PCSK9 敲除的 HSC-2（口腔鳞癌细胞系）和 MC3（黏液表皮样癌细胞系），并结合药理学抑制剂（PCSK9i）处理，在 2D 培养模型中运用细胞计数试剂盒 - 8（CCK-8）、软琼脂克隆形成实验、平板克隆实验，在 3D 培养模型中通过悬滴球体形成实验结合死活染色，系统评估 PCSK9 对细胞生长、增殖及非锚定依赖性生长的影响。同时，借助蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测凋亡相关指标 c-PARP，通过细胞周期分析测定亚 G1 期细胞比例，利用膜联蛋白 V（Annexin V）染色鉴定凋亡细胞，深入探究 PCSK9 对细胞凋亡的调控作用。在转移能力评估方面，采用伤口愈合实验和 Transwell 迁移 / 侵袭实验，观察 PCSK9 表达变化对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。
PCSK9 表达与头颈癌的临床相关性
计算机分析显示，相较于正常组织，PCSK9 在包括头颈癌在内的多种癌组织中显著高表达，其 mRNA 水平与头颈癌临床病理特征存在一定关联，提示 PCSK9 可能参与头颈癌发生发展。
PCSK9 对头颈癌细胞增殖与生长的影响
在 2D 培养体系中，无论是基因敲除还是药物抑制 PCSK9 表达，均未显著影响 HSC-2 和 MC3 细胞的增殖速率、克隆形成能力及非锚定依赖性生长（软琼脂克隆实验）。在 3D 球体培养模型中，PCSK9 缺失或抑制也未对球体形成效率及生长状态产生明显作用，表明 PCSK9 对头颈癌细胞的基础增殖能力影响微弱。
PCSK9 对细胞凋亡的调控作用
凋亡相关实验显示，PCSK9 敲除或抑制后，c-PARP 表达未出现显著变化，亚 G1 期细胞比例及 Annexin V 阳性细胞数无明显差异，说明 PCSK9 在头颈癌细胞凋亡诱导过程中未发挥关键作用。
PCSK9 对肿瘤转移能力的影响
伤口愈合实验表明，PCSK9 表达下调仅轻微延缓细胞单层愈合速度；Transwell 实验显示，PCSK9 缺失或抑制对头颈癌细胞的迁移和侵袭能力仅有边际影响，提示 PCSK9 并非驱动头颈癌转移的关键因素。
综合实验结果，尽管计算机分析提示 PCSK9 与头颈癌进展存在相关性，但功能性实验证实其对头颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭等核心恶性特征影响极小。研究结论指出，PCSK9 在头颈癌中扮演 “乘客基因” 角色，其表达变化可能是基因组不稳定的伴随现象，而非肿瘤进展的驱动因素。
这一发现具有双重意义：一方面，澄清了 PCSK9 在头颈癌中的争议性角色，为后续研究排除了一个非必要靶点；另一方面，进一步强调了 “乘客基因” 在肿瘤基因组中的广泛存在，提示研究者需谨慎区分基因表达相关性与功能性作用。对于临床而言，避免将 PCSK9 作为头颈癌治疗的潜在靶点，可集中资源探索更具功能性的驱动基因或代谢通路，为开发精准靶向疗法提供更清晰的方向。此外，该研究通过多模型、多技术的综合验证，为类似基因的功能评估提供了方法论参考，有助于提升肿瘤基因研究的严谨性与可靠性。
