缓冲层与富血小板血浆法制备的血小板浓缩物中GPVI依赖性功能差异：生物力学力对血小板制备的影响及临床意义

本研究针对血小板制备过程中生物力学剪切力导致的GPVI受体损伤问题，通过比较缓冲层(BC)和富血小板血浆(PRP)两种制备方法，发现BC法制备的血小板浓缩物(PCs)在储存期间能更好地维持GPVI表达水平、降低活性氧(ROS)生成和受体脱落，并显著改善胶原诱导的聚集和粘附功能。该研究为优化血小板制备工艺提供了重要理论依据，对提高输血疗效具有重要临床价值。

　　

在临床输血治疗中，血小板输注是控制出血并发症的关键手段。然而，血小板在制备和储存过程中会经历一系列功能损伤，这种现象被称为血小板储存损伤(PSL)。其中，糖蛋白VI(GPVI)作为血小板表面重要的胶原受体，对血小板粘附和血栓形成起着核心作用。但GPVI恰恰是最易受生物力学剪切力和氧化应激影响的受体之一，在制备过程中容易发生脱落或功能丧失。目前临床上主要采用两种方法制备血小板浓缩物(PCs)：富血小板血浆(PRP)法和缓冲层(BC)法。这两种方法在离心速度和细胞成分保护方面存在显著差异，但究竟哪种方法能更好地保护GPVI功能，此前尚缺乏系统研究。

针对这一关键问题，伊朗输血医学研究与教育高等研究院的研究团队开展了一项创新性研究，相关成果发表在《Annals of Hematology》上。研究人员通过比较BC-PCs和PRP-PCs在储存期间GPVI的表达变化、脱落情况以及功能状态，揭示了不同制备方法对血小板质量的影响机制。

研究采用了多种关键技术方法：流式细胞术分析GPVI表达和细胞内ROS水平；ELISA检测可溶性GPVI；荧光显微镜观察血小板在胶原基质上的粘附和铺展；血小板聚集仪测定胶原诱导的聚集反应。所有实验均在储存第0、1、3、5天进行，样本来自符合标准的志愿者捐献的全血制品。

研究结果部分，"Higher levels of cytosolic ROS generation in PRP-PCs compared to BC-one during storage"显示，PRP法制备的血小板在储存第1、3天表现出显著更高的ROS水平，这表明PRP法可能导致更严重的氧化应激。"Higher levels of GPVI expression in BC-PCs compared to PRP-one during storage"发现，BC法制备的血小板在整个储存期间都维持了更高的GPVI表达水平，特别是在第1、3天差异显著。"Lower levels of GPVI shedding in BC-PCs compared to PRP-one during storage"结果表明，PRP法制备的血小板GPVI脱落更明显，第3天差异达到统计学意义。"Superior aggregation response of the BC-PCs over the PRP-ones"证实，BC法制备的血小板对胶原的聚集反应更强，特别是在储存第3、5天。"Superior adhesive capacity of the BC-PCs over the PRP-ones"通过荧光显微镜观察发现，BC法制备的血小板在胶原基质上的粘附和铺展能力更好，铺展面积更大。

讨论部分指出，BC法制备的血小板之所以能更好地维持GPVI功能和整体质量，可能得益于以下几个机制：首先，BC法初始离心时残留的红细胞可能形成保护屏障，减少血小板受到的剪切力损伤；其次，BC法制备的血小板氧化应激水平更低，减少了ROS介导的ADAM10金属蛋白酶激活和GPVI脱落；最后，BC法制备的血小板代谢状态更稳定，为GPVI功能维持提供了有利条件。这些发现为临床选择血小板制备方法提供了重要依据，特别对于需要长期储存或长途运输的血小板制品，BC法可能更具优势。

该研究的临床意义在于：为血站优化血小板制备工艺提供了科学依据；提示在PRP法制备过程中可能需要添加ROS清除剂等保护性措施；为评估血小板储存质量建立了更全面的指标体系。未来研究可进一步探索这些体外发现是否能在动物血栓模型中转化为更好的止血效果，以及如何将这些发现应用于改善临床输血疗效。