MeltPro MTB/PZA检测技术对耐多药结核病吡嗪酰胺耐药性的精准预测价值及临床意义

这篇研究通过评估MeltPro MTB/PZA检测技术对吡嗪酰胺（PZA）耐药性的预测效能，揭示了pncA基因突变是耐多药结核病（MDR-TB）中PZA耐药的主要驱动因素。该检测技术展现出与全基因组测序（WGS）和表型药敏试验（pDST）相当的敏感性（91.89%）和特异性（86.27%），为临床提供了一种快速、可靠的分子诊断工具，助力MDR-TB精准治疗。

　　

ABSTRACT
结核病（TB）管理面临吡嗪酰胺（PZA）耐药的严峻挑战。本研究对125株中国温州耐多药结核分枝杆菌（MTB）临床分离株进行全基因组测序（WGS），聚焦pncA、rpsA和panD基因突变，并采用MeltPro MTB/PZA检测技术评估其预测效能。结果显示：PZA耐药率高达59.20%，其中pncA突变占64.00%，且97.30%的耐药菌株携带pncA突变。MeltPro MTB/PZA与WGS的一致性达92.50%（PPA），凸显其作为快速分子诊断工具的临床价值。

RESULTS
1. 临床分离株特征与耐药谱
125株MDR-TB中，40.80%仅对异烟肼（INH）和利福平（RIF）耐药，48.60%为预广泛耐药结核（pre-XDR-TB），5.10%为广泛耐药结核（XDR-TB）。PZA耐药率在pre-XDR-TB和XDR-TB中分别达77.61%和100%，显著高于单纯INH/RIF耐药株（29.41%）。

2. pncA/rpsA/panD突变谱
WGS检出80株（64.00%）pncA突变，其中72株（90.00%）为PZA耐药。突变类型多样，包括-11A>G启动子突变（7.50%）和V139A（6.25%）等热点。rpsA突变仅6.40%，且多与pncA突变共存；panD突变未检出。

3. 检测技术效能对比
以pDST为金标准，WGS敏感性（97.30%）略高于MeltPro（91.89%），但两者特异性相当（84.31% vs 86.27%）。MeltPro与WGS的阴性符合率（NPA）达97.78%，kappa值0.881，显示高度一致性。

DISCUSSION
pncA突变是MDR-TB中PZA耐药的核心机制，其突变位点分散且无显著热点，增加了分子检测难度。MeltPro MTB/PZA通过多色熔解曲线分析技术，可快速识别pncA编码区及启动子突变，克服传统pDST因酸性环境导致的假阳性问题。尽管存在少数假阴性（如突变位于探针末端时ΔT_m<1.6°C），该技术仍为资源有限地区提供了可行的替代方案。

MATERIALS AND METHODS
研究纳入2014-2017年温州中心医院125株MDR-TB存档菌株。PZA药敏采用MGIT 960系统（临界浓度100 mg/L），DNA提取后分别进行MeltPro检测（覆盖pncA全编码区及-16至-1启动子）和Illumina平台WGS（比对H37Rv参考基因组NC_000962.3）。统计分析采用OpenEpi工具，kappa>0.75判定为高度一致。

创新与局限
本研究首次系统评估MeltPro在中国东南沿海MDR-TB人群的应用价值，但pDST作为金标准的可靠性、部分未分类pncA突变的临床意义（如T167I）仍需进一步验证。未来需扩大样本多样性以提升结论普适性。