靶向α-突触核蛋白的单克隆抗体Amlenetug（Lu AF82422）在突触核蛋白病治疗中的理性选择与功能表征

本研究针对帕金森病（PD）、多系统萎缩（MSA）等突触核蛋白病（synucleinopathies）的病理进展机制，通过理性筛选靶向α-突触核蛋白（α-syn）的单克隆抗体Amlenetug（Lu AF82422），系统评估其抑制病理蛋白聚集、阻断种子摄取及清除C端截短片段（CTTs）的功能特性。研究发现该抗体通过结合α-syn 112-117表位，显著抑制多种纤维组装体（PFFs/Fibrils）及MSA患者脑提取物诱导的病理播散，为延缓疾病进展的免疫治疗策略提供新依据。

　　

突触核蛋白病是一类以α-突触核蛋白（α-syn）异常聚集为特征的神经退行性疾病，包括帕金森病（PD）、路易体痴呆（DLB）和多系统萎缩（MSA）。这些疾病的共同病理特征是α-syn在神经元或胶质细胞中形成路易小体（LBs）或胶质细胞包涵体（GCIs）。近年研究发现，α-syn病理蛋白可像朊病毒一样在脑内播散，但现有临床抗体疗法如prasinezumab和cinpanemab的疗效有限，亟需开发更具靶向性的治疗策略。

为突破这一瓶颈，H. Lundbeck A/S与Genmab BV的研究团队联合开发了人源化单克隆抗体Amlenetug（Lu AF82422），并通过多维度实验验证其治疗潜力。研究首先利用HuMAb转基因小鼠免疫筛选获得靶向α-syn C端（112-117表位）的抗体，随后采用X射线晶体学解析抗体-抗原复合物结构（PDB ID: 8B9V），结合自由能扰动计算（FEP）明确关键结合残基（I112-L113/D115-M116）。功能实验显示，Lu AF82422能剂量依赖性地抑制PFFs、Fibrils等多种α-syn纤维组装体及MSA患者脑提取物诱导的原代神经元病理播散（IC₅₀ 0.3 nM），其机制主要通过阻断种子内吞（减少80% uptake）和抑制C端截短片段（1-119）积累。在体实验中，抗体共注射或外周给药（100 mg/kg）均可显著减少小鼠纹状体注射模型的黑质和运动皮层pS129-α-syn阳性细胞（p<0.05）。与临床抗体对比发现，Lu AF82422对截短α-syn种子的抑制效果优于prasinezumab（EC₅₀ 0.01 nM vs 6 nM）。

关键技术方法包括：1）从MSA/PD患者脑组织（BioIVT来源）分离sarkosyl不溶性聚集体；2）基于原代F28转基因神经元（过表达人α-syn）的种子扩增模型；3）均相时间分辨荧光（HTRF）定量病理聚集体；4）pHrodo标记PFFs的内吞追踪；5）立体定位注射小鼠的病理传播分析。

研究结果部分：

1. 抗体生成与表位鉴定：通过免疫肽阵列和晶体结构（2.1 ?分辨率）锁定Lu AF82422结合表位于α-syn 112-117（ILEDMP），其重链CDR区与D115/M116形成关键疏水相互作用（ΔΔG>3 kcal/mol）。
2. 体外病理抑制：在F28神经元中，Lu AF82422可抑制P91（0.25 μg/ml）、Ribbons（0.6 μg/ml）等不同构象纤维的播种效应，并减少pHrodo-PFFs内吞（p<0.001）。
3. 体内疗效验证：外周给药组（-2周预处理）使运动皮层病理减少50-60%（p<0.05），但延迟给药（+1周）无效，提示需早期干预。
4. 临床相关性：免疫沉淀-WB证实Lu AF82422可结合PD/DLB患者脑中的pS129-α-syn和CTTs，HTRF显示其能清除>90% MSA脑提取物聚集体。

结论与意义：该研究首次阐明靶向α-syn 112-117表位的抗体可通过"双管齐下"机制——既阻断病理种子播散又抑制毒性片段积累，为突触核蛋白病提供差异化治疗策略。晶体结构指导的理性设计提升了抗体对多构象聚集体（含MSA特异性株）的广谱结合力，而临床前数据支持的CSF暴露量（0.16-0.51%）为其进入II期临床试验（NCT05104476）奠定基础。尽管该抗体对已形成的病理无效，但为疾病修饰疗法开发提供了重要范式：即针对不同α-syn蛋白水解片段（如1-119/1-122）设计抗体，可能更有效阻断病理级联反应。