地龙提取物通过调控小胶质细胞极化及Ang1/Tie2/Ang2通路促进脑缺血再灌注损伤后血管新生的机制研究

针对脑缺血后炎症反应和血管修复不足的难题，天津科研团队开展地龙提取物（EWE）调控小胶质细胞M1/M2极化的研究。通过体外LPS诱导BV2细胞和体内MCAO/R模型，发现EWE能抑制促炎因子（IL-1β）、促进抗炎因子（IL-10），并通过Ang1/Tie2通路增强HCMEC/D3细胞血管生成能力，为卒中治疗提供新策略。

　　

论文解读

脑血管疾病是全球致残和死亡的主因之一，其中缺血性卒中因治疗时间窗短、出血风险高，临床亟需新疗法。尽管血管再通技术（如溶栓）能恢复血流，但再灌注损伤引发的炎症风暴和血管修复障碍仍是难题。小胶质细胞作为中枢免疫哨兵，其M1型（促炎）与M2型（抗炎）的极化平衡直接影响卒中后血管新生（Angiogenesis）——这一过程依赖内皮细胞迁移和管腔形成，而Ang1/Tie2信号通路在此中起核心作用。传统中药地龙（Pheretima aspergillum）虽已知具有抗炎和促循环作用，但其调控神经-血管耦合的机制尚未阐明。

天津科研团队通过整合体外和体内实验，首次揭示地龙提取物（EWE）通过重编程小胶质细胞表型促进血管新生的分子机制。研究采用LPS刺激BV2小胶质细胞模拟炎症环境，结合氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）损伤的人脑微血管内皮细胞（HCMEC/D3），并建立大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）小鼠模型。关键技术包括：ELISA检测细胞因子（IL-1β、IL-10等）、免疫荧光标记微胶质表型标志物（CD16⁺/IBA-1⁺和CD206⁺/IBA-1⁺）、Transwell迁移实验和Matrigel管形成实验评估血管生成能力，以及TTC染色量化脑梗死体积。

主要结果

1. EWE调控小胶质细胞极化：在LPS诱导的BV2细胞中，EWE剂量依赖性地抑制NO释放，下调M1标志物CD16和IL-1β，同时上调M2标志物CD206和IL-10，提示其促进抗炎表型转换。
2. 条件培养基促血管生成：EWE处理的BV2细胞条件培养基（EWE-CM）显著增强HCMEC/D3细胞的迁移和管腔形成能力，Western blot显示Ang1/Tie2通路关键蛋白表达升高。
3. 体内神经保护作用：MCAO/R小鼠经EWE治疗后，神经功能评分改善，梗死体积减少40%，脑组织CD206⁺微胶质增多，且新生血管标志物ki67⁺/Biotinylated LEL⁺表达上调。

结论与意义
该研究阐明EWE通过双重机制发挥作用：一方面抑制M1型微胶质释放促炎因子，减轻神经炎症；另一方面激活Ang1/Tie2通路促进血管重塑。这种“免疫-血管”协同调控为卒中治疗提供了新思路——将传统中药与现代神经血管单元理论结合，突破现有疗法的时空局限性。作者建议EWE可与神经保护剂联用以增强疗效，未来需进一步解析其活性成分（如特定多肽或核苷酸）的具体作用靶点。论文发表于《Brain Research》，为中药现代化研究提供了范式。