优化胎盘间充质干细胞P-MSC/TERT308的刃天青活力检测方法以提升药物毒性筛查可靠性

本研究针对胎盘源间充质干细胞(P-MSC/TERT308)在药物毒性筛选中数据可重复性差的难题，通过系统优化刃天青(Resazurin)活力检测的激发/发射波长(λEx-λEm)、孵育时间等关键参数，建立标准化操作流程(SOP)，使检测不确定度(MU)降至10%以下。该成果为欧盟"生命拯救者"(LifeSaver)项目提供了可靠的胎盘模型毒性评估工具，对规范妊娠期药物使用具有重要意义。

　　

每年欧洲约75%的新生儿死亡与早产相关，而环境污染物和药物使用不当是重要诱因。欧盟"生命拯救者"(LifeSaver)项目试图建立胎盘-子宫界面体外模型来评估妊娠期药物风险，但前期研究发现细胞毒性检测数据存在显著不一致性——这直接影响了药物安全评价的可靠性。意大利国家计量研究院(INRIM)的Jessica Petiti团队选择胎盘源永生化间充质干细胞P-MSC/TERT308作为模型，针对最常用的刃天青检测法展开系统优化。

研究采用多波长扫描(530-545nm激发/585-595nm发射)结合不同细胞密度梯度(5×10³-3.5×10⁴ cells/cm²)，通过荧光强度(FI)线性分析和Cohen's d效应量计算，最终确定535-590nm为最佳λ_Ex-λ_Em组合。在孵育时间优化中发现：高密度细胞(>1.7×10⁴ cells/cm²)仅需4小时即可获得R²=0.998的线性结果，而低密度样本需延长至6小时。特别值得注意的是，通过12次重复实验验证的检测限(LoD)低至125 cells/cm²，定量限(LoQ)为400 cells/cm²，显著优于常规MTT法的灵敏度。

在方法学验证部分，研究人员设计了跨三天的重复实验。数据显示：不同操作者在三种细胞密度下的平均重复性为2.2%，再现性为4.3%，测量不确定度(MU)控制在9.8%以内——这远低于毒理学分析20%的常规接受标准。通过配套开发的标准化操作流程(SOP)，成功将移液误差(0.5%)和仪器波动(<0.5%)对结果的影响降至最低。

该研究首次为胎盘间充质干细胞建立了可追溯的刃天青检测标准。其创新性体现在：1)通过光谱特性优化显著降低背景噪声；2)建立密度-时间响应矩阵指导实验设计；3)引入计量学概念量化检测可靠性。这些成果不仅解决了LifeSaver项目中的关键技术瓶颈，更为干细胞毒理学研究提供了方法学范式。未来结合机器学习预测最佳检测条件，有望进一步提升跨实验室数据的可比性。

论文同时指出当前方案的局限性：P-MSC/TERT308细胞的特殊性质可能导致结果外推受限，且细胞代次、操作手法等潜在变异源仍需更广泛验证。但毫无疑问，这项工作为破解"临床前研究可重复性危机"提供了切实可行的解决方案——正如作者强调的，在细胞反应评估中，获得一致的结果远比选择何种方法更为重要。