基于荧光检测的环保型RP-HPLC生物分析方法同步测定非洛地平与美托洛尔及其在高血压治疗中的应用研究

本研究针对心血管疾病治疗中非洛地平(FDP)与美托洛尔(MTP)联合用药的监测需求，开发了一种环保、高灵敏度的RP-HPLC荧光检测方法。研究人员通过优化色谱条件（乙醇-磷酸盐缓冲液体系，pH 2.5），实现了两种药物在0.01-1.00 μg/mL(FDP)和0.003-1.00 μg/mL(MTP)范围内的同步检测，线性相关系数r2>0.999，回收率98-100%。该方法通过ICH Q2 R2和FDA生物分析验证，适用于药物制剂和血浆样本分析，且经AGREE、MoGAPI等工具认证为绿色分析方法，为临床药效监测提供了高效环保的解决方案。

　　

心血管疾病(CVDs)是全球死亡的首要原因，每年导致约1790万人死亡，其中85%源于心脏病发作和中风。高血压作为关键风险因素，常需联合用药治疗。非洛地平(FDP，钙通道阻滞剂)与美托洛尔(MTP，β受体阻滞剂)是临床常用组合，但现有分析方法存在成本高、步骤复杂或环境负担大等问题。为此，Misr国际大学与开罗大学的研究团队开发了一种环保型RP-HPLC荧光检测方法，成果发表于《BMC Chemistry》。

研究采用Agilent 1200系列HPLC仪，搭配荧光检测器，以Inertsil C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)分离，乙醇-30 mM磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5)为流动相，流速1.0 mL/min。通过波长编程(FDP: λ_ex/λ_em=367/440 nm；MTP: λ_ex/λ_em=230/300 nm)实现同步检测，并以内标他达拉非(TDL)校正。样本队列包括纯品、Logimax?片剂及VACSERA提供的加标人血浆，经乙腈蛋白沉淀前处理。

方法开发与优化
通过考察pH值(2.5最佳)和乙醇比例(40:60 v/v)，解决了FDP(疏水性强)与MTP(极性高)的分离难题。血浆预处理采用乙腈沉淀法，回收率>95%，显著优于甲醇/乙醇。

方法验证
线性范围覆盖两种药物的血药峰浓度(C_max)，FDP(0.01-1.00 μg/mL)和MTP(0.003-1.00 μg/mL)的r²均>0.9998。日内/日间精密度RSD<2%，准确度偏差±2%(纯品)和±10%(血浆)。LOD达0.001 μg/mL(FDP)和0.00096 μg/mL(MTP)，系统适用性参数(理论板数>3000，分离度>5)符合USP标准。

生物分析验证
按FDA指南验证血浆样本分析性能：短期/冻融/长期稳定性试验显示药物稳定性良好(回收率97-99%)，携带效应<8%。加标血浆中FDP与MTP的提取回收率分别为96.72-98.87%和91.05-98.34%。

绿色性评估
AGREE评分0.71(优于文献方法0.65)，MoGAPI绿色指数77%，RGBfast显示其溶剂用量与能耗显著低于传统HPLC-UV法，符合绿色化学原则。

结论与意义
该研究首次建立了一种同步测定FDP与MTP的环保型HPLC-FD方法，兼具高灵敏度(LOQ达ng/mL级)、低成本(较LC-MS/MS)和低环境负荷(乙醇替代乙腈)优势。通过全面验证，该方法适用于临床药动学研究与治疗药物监测，尤其适合资源有限地区推广。其绿色设计理念为分析化学可持续发展提供了范例，同时为固定复方制剂的质量控制提供了新工具。研究团队特别指出，尽管MTP早期洗脱问题未完全解决，但通过方法优化仍确保了分析可靠性，未来可通过柱温调控进一步改进。