单孔分析技术在COVID-19大流行期间评估地诺单抗生物类似药免疫原性影响的应用研究

为解决COVID-19大流行期间生物类似药免疫原性评估的潜在干扰问题，研究人员通过验证SARS-CoV-2抗IgG ELISA检测方法（采用单孔分析技术），评估了健康受试者中抗SARS-CoV-2 IgG抗体对地诺单抗（denosumab）免疫原性的影响。结果显示，82%受试者存在抗SARS-CoV-2 IgG抗体，但未对药物免疫原性产生临床显著影响。该研究为疫情期间生物制剂临床试验数据解读提供了关键方法学支持。

　　

COVID-19大流行对全球临床试验带来了前所未有的挑战，尤其是生物制剂免疫原性评估可能受到自然感染或疫苗诱导的免疫反应干扰。地诺单抗（denosumab）作为首个获批的RANKL抑制剂生物类似药，其免疫原性数据可靠性直接影响临床安全性评价。然而，疫情期间高发的SARS-CoV-2感染和疫苗接种是否会影响药物免疫原性评估，成为监管机构和制药企业共同关注的科学问题。

Hexal AG（Sandoz公司）的研究团队在《Drugs in R》发表研究，通过建立优化的SARS-CoV-2血清学检测策略，评估了499名健康受试者中抗SARS-CoV-2 IgG抗体与地诺单抗免疫原性的关联。研究采用FDA紧急使用授权（EUA）的SCoV-2 Detect^TM IgG ELISA试剂盒，通过单孔分析技术检测1970份血清样本，同时分析6408份样本的抗药物抗体（ADA）。关键方法包括：1）预验证评估试剂盒灵敏度/特异性；2）按生物分析指南进行方法学验证；3）队列样本来自2020-2022年德国临床试验；4）免疫状态比值（ISR）定量分析抗体反应。

3.1 试剂盒灵敏度与特异性验证
使用13例住院患者、7例无症状感染者及6例疫苗接种者血清验证，结果显示对重症患者灵敏度达92%，疫苗接种者达100%，但无症状感染者仅57%。特异性测试（2019年前样本）达100%，证实该方法适用于临床试验样本检测。

3.2 单孔与双孔分析验证
创新性验证单孔分析可行性，结果显示两种模式精度相当（CV≤16%），药物耐受性均达30μg/mL，ADA耐受性5μg/mL。临床样本中仅1%（24/1970）需重复检测，显著提升实验室效率。

3.3 临床样本抗体检测
82%（408/499）受试者检出抗SARS-CoV-2 IgG，其中疫苗接种者阳性率99%（321/325），自然感染者100%（55例）。抗体水平（ISR 1.1-7.4）在感染与疫苗接种组间无显著差异，中位数分别为6.3和5.8。

3.4 对药物免疫原性影响
64%（319/499）受试者出现ADA，但均为低浓度（<20ng/mL）且短暂性。中和抗体（NAb）阳性率<1%，与抗SARS-CoV-2 IgG无关联，证实COVID-19免疫应答未增强药物免疫原性。

该研究首次系统评估了COVID-19免疫背景对生物类似药临床试验的影响。通过方法学创新，证实单孔分析在保证数据质量的同时可提升检测效率，为疫情期间生物制剂评估提供范式。更重要的是，Ribes等发现尽管82%受试者存在抗SARS-CoV-2 IgG，但地诺单抗的免疫原性特征与既往数据一致，缓解了监管机构对"免疫干扰"的担忧。研究还揭示了ACE2-RANKL通路在COVID-19与骨代谢中的潜在关联，为理解病毒感染与骨质疏松的分子机制提供新视角。这些发现不仅支持地诺单抗生物类似药的临床开发，也为未来突发公共卫生事件中的临床试验设计提供了重要参考。