ZDHHC7与PPT1动态调控SPRY4棕榈酰化：克服骨肉瘤顺铂耐药的新治疗策略

为解决骨肉瘤(OS)顺铂耐药难题，研究人员通过多组学分析和功能实验，揭示PPT1通过去棕榈酰化降解SPRY4激活MAPK通路的关键机制，证实PPT1抑制剂GNS561可协同增强顺铂敏感性，为临床克服耐药提供新靶点。

　　

骨肉瘤是青少年最常见的恶性骨肿瘤，尽管手术联合顺铂等化疗药物（cisplatin）的MAP方案（包含甲氨蝶呤、阿霉素）已广泛应用，但耐药导致的治疗失败使转移患者5年生存率不足20%。近年研究发现，蛋白质棕榈酰化（palmitoylation）修饰酶PPT1（palmitoyl-protein thioesterase 1）在肿瘤耐药中起关键作用，但其在骨肉瘤中的机制尚未阐明。

为破解这一难题，中南大学的研究团队在《Research》发表重要成果。他们通过整合GSE152048等单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据和TARGET-OS等大样本队列，首次发现PPT1在骨肉瘤中异常高表达且与不良预后显著相关。借助OncoPredict算法，研究者证实PPT1表达水平与顺铂半数抑制浓度（IC₅₀）呈正相关，分子对接实验更发现PPT1可直接结合顺铂分子。

关键实验技术
研究通过梯度浓度诱导构建顺铂耐药细胞株MG63/R和U2OS/R；采用树脂辅助捕获（RAC）和点击化学（click chemistry）技术检测SPRY4棕榈酰化水平；利用SynergyFinderPlus软件基于Bliss等4种模型评估GNS561与顺铂协同效应；结合显微CT（micro-CT）量化骨结构参数。

Elevated expression of PPT1 in OS
分析GSE11416等4个数据集显示，PPT1在骨肉瘤组织表达量较正常组织高3.2-5.8倍（P<0.001），且MG63细胞系表达最高。生存分析提示高PPT1患者5年生存率降低42%（P=0.003）。

Role of elevated PPT1 expression in multidrug resistance
OncoPredict显示PPT1表达与198种药物IC₅₀显著相关（Spearman r=0.63）。耐药细胞中PPT1蛋白水平升高2.1倍（P<0.001），分子对接发现其与顺铂存在4个结合位点。

PPT1 enhances proliferation and suppresses apoptosis
敲低PPT1使MG63/R细胞增殖率下降68%（P<0.001），凋亡率增加3.5倍；过表达则促进软琼脂集落形成（P=0.002）。显微CT显示shPPT1组小鼠骨小梁体积分数（Tb.BV/TV）提升41%（P=0.008）。

PPT1 and ZDHHC7 antagonistically regulate SPRY4 palmitoylation
质谱鉴定出37个PPT1互作蛋白，Co-IP验证其与SPRY4直接结合。Css-Palm预测C165为关键棕榈酰化位点，突变该位点使SPRY4棕榈酰化水平降低82%（P<0.001）。ZDHHC7过表达使SPRY4棕榈酰化增加2.3倍，而PPT1过表达则促进其降解。

Synergistic effect of GNS561 and cisplatin
1μM GNS561使顺铂IC₅₀降低57%（P=0.004），联合治疗凋亡率提高4.1倍。Bliss模型协同得分8.85，体内实验显示联合组肿瘤体积缩小76%（P<0.001）。

这项研究首次揭示PPT1-ZDHHC7通过动态调控SPRY4棕榈酰化（C165位点）影响MAPK通路激活的新机制。临床前数据表明，PPT1抑制剂GNS561不仅能单药抑制骨肉瘤进展，更可逆转顺铂耐药——当与顺铂联用时，通过破坏"棕榈酰化-去棕榈酰化"循环，使耐药细胞凋亡率提升至单药的4倍以上。该发现为克服骨肉瘤化疗耐药提供了双重靶向治疗策略，GNS561有望成为首个针对蛋白质修饰酶的抗骨肉瘤临床候选药物。研究团队建议未来开展针对PPT1抑制剂的II期临床试验，以验证其在改善患者生存方面的转化价值。