miR-1246通过调控GSK3β/β-catenin通路增强非小细胞肺癌多倍体巨癌细胞化疗耐药性的机制研究

本研究针对非小细胞肺癌（NSCLC）化疗耐药性难题，揭示了多倍体巨癌细胞（PGCCs）通过miR-1246/GSK3β/β-catenin轴增强耐药性的新机制。研究人员通过miRNA测序、功能实验及通路分析，发现miR-1246上调可促进PGCCs的存活、迁移和上皮-间质转化（EMT），为克服NSCLC化疗耐药提供了潜在靶点。

　　

肺癌是全球癌症相关死亡的首要原因，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占比高达80%。尽管诊断和治疗手段不断进步，NSCLC患者的5年生存率仍仅为16%，化疗耐药是临床面临的主要挑战。近年来，研究发现化疗药物如多西他赛（Doc）可诱导肿瘤细胞形成多倍体巨癌细胞（PGCCs），这类细胞具有显著的基因组不稳定性和耐药性，但其分子机制尚不明确。

为解决这一问题，来自北部战区总医院的研究团队在《Discover Oncology》发表了题为“miR-1246 enhances chemo-resistance of polyploid giant cancer cells in H1299 cells by targeting GSK3β/β-catenin”的研究。该研究通过构建Doc诱导的H1299细胞PGCCs模型，结合miRNA测序和功能验证，首次揭示了miR-1246通过靶向抑制GSK3β、激活β-catenin信号通路，进而促进PGCCs的化疗耐药、抑制凋亡并增强迁移能力的分子机制。这一发现为逆转NSCLC耐药提供了新策略。

研究主要采用以下技术方法：1）Doc诱导PGCCs模型构建及DNA含量分析；2）miRNA测序与生物信息学靶点预测；3）双荧光素酶报告基因验证miR-1246与GSK3β的靶向关系；4）CCK-8和活/死染色评估化疗敏感性；5）Transwell和划痕实验分析迁移能力；6）Western blot和qPCR检测通路关键分子表达。

研究结果：

1. NSCLC细胞通过形成PGCCs抵抗多西他赛治疗
   Doc处理的H1299细胞表现为核体积增大、多倍体化（8.50N vs 2.76N）和G2/M期阻滞，且凋亡率显著降低。临床样本验证化疗后NSCLC组织中PGCCs比例升高。

2. miR-1246调控PGCCs化疗耐药及子代细胞生成
   miRNA测序发现PGCCs中miR-1246显著上调。功能实验显示，抑制miR-1246可降低耐药基因MDR1/MRP1表达，抑制子代细胞产生；而过表达则增强对Doc和顺铂的耐药性。

3. 抑制miR-1246诱导PGCCs凋亡
   TUNEL和免疫荧光显示miR-1246抑制剂组cleaved caspase-3阳性率升高，促凋亡蛋白Bax上调而抗凋亡蛋白Bcl-2下调。

4. miR-1246促进PGCCs迁移及EMT
   划痕和Transwell实验证实miR-1246过表达增强细胞迁移能力，伴随EMT标志物N-cadherin和Snail表达升高。

5. miR-1246通过GSK3β/β-catenin通路发挥作用
   双荧光素酶验证miR-1246直接靶向GSK3β 3'UTR。使用GSK3β抑制剂IM-12可逆转miR-1246抑制剂的效应，恢复β-catenin活性和耐药表型。

结论与意义：
该研究首次阐明PGCCs通过miR-1246/GSK3β/β-catenin轴获得化疗耐药性的机制：miR-1246通过抑制GSK3β解除对β-catenin的降解，进而激活下游耐药、抗凋亡和EMT相关基因。这一发现不仅解释了PGCCs在NSCLC复发转移中的关键作用，还为联合miR-1246抑制剂与化疗药物提供了理论依据。未来需在更多NSCLC细胞系和动物模型中验证这一靶点的临床转化价值。