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为应对白血病等血癌治疗中细胞耐药问题，研究人员开展新型大肠杆菌（E. coli）II 型 L - 天冬酰胺酶（L-ASNase）变体研究。该变体兼具 L - 谷氨酰胺酶（L-Gln）活性，经克隆表达、纯化后展现高活性与热稳定性，分子对接揭示催化机制，为后续毒理研究奠定基础。
微生物来源的 L - 天冬酰胺酶 II（L-ASNase II）是治疗白血病及其他血液癌症的关键生物制药。针对治疗中出现的细胞耐药机制，本研究克隆了一种新型大肠杆菌（E. coli）II 型 L-ASNase 变体，其具有独特的 L - 谷氨酰胺酶（L-Gln）协同活性。该变体被克隆至 pET28a（+）载体，并在大肠杆菌 BL21 (DE3) pLysS 中表达为胞质蛋白，分子量为 38.390 kDa。通过亲和层析纯化的重组 L-ASNase 表现出 7179.5 U/mg 的高比活性，且具有极强的热稳定性。分子对接的计算机模拟分析及实验验证表明，其对 L - 天冬酰胺（L-Asn）和 L-Gln 的亲和力相近。纯化后的酶对 L-Asn 表现出高双重活性（Km为 0.627 mM，Vmax为 385 μmol?min-1），对 L-Gln 的特异性为 90%（Km为 0.715 mM，Vmax为 376 μmol?min-1）。分子对接研究显示，基于相互作用残基分析，大肠杆菌 EGY L-ASNase 遵循单置换催化机制。本研究进行的生化表征和免疫原性预测，有助于更好地理解该新变体的免疫原性决定因素及其他特性，为未来体外和体内细胞毒性测试的潜力研究提供了依据。
