太平洋白对虾抗哈维氏弧菌新机制：i型溶菌酶2(Lyz-i2)剪接供体SNP的发现与分子育种应用

针对哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)严重威胁凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖的产业难题，中国科学院团队首次鉴定出i型溶菌酶2(Lvlyz-i2)剪接供体位点SNP 1271G>A，发现短异构体Lvlyz-i2S对革兰阴性菌展现更强溶菌活性，并开发ARMS法快速检测技术，为分子标记辅助育种提供新靶点(p<0.05)。

　　

【研究背景】
在全球水产养殖业中，凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)凭借生长快、抗逆性强等优势占据重要地位，但集约化养殖导致的弧菌病(Vibriosis)每年造成数十亿美元损失。其中哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)尤为致命，传统防控手段收效有限。先天免疫关键因子——i型溶菌酶2(lyz-i2)此前被证实能广谱抗菌，但其剪接变异与抗病性状的关联仍是未解之谜。

【研究方法】
中国科学院南海海洋研究所团队选取中国湛江三品系对虾(含美国PRIMO品系)，通过cDNA克隆发现Lvlyz-i2存在638bp(L型)和492bp(S型)两种剪接体。采用扩增阻滞突变系统(ARMS)开发SNP 1271G>A检测方法(625bp-A等位基因/221bp-G等位基因)，结合细菌裂解实验和广义线性混合模型分析基因型-表型关联。

【研究结果】

1. 分子克隆与序列分析：
   在30尾对虾中发现内含子II/外显子III交界处G>A突变导致长(Lvlyz-i2L)短(Lvlyz-i2S)异构体分化，短异构体缺失第3外显子45bp序列(GenBank: KU500357.1)。

2. 溶菌活性比较：
   Lvlyz-i2S对哈维氏弧菌的溶菌活性显著强于L型(p<0.05)，但对大肠杆菌(Escherichia coli)作用较弱，且缺乏典型催化残基(Glu/Asp/Ser/His)。

3. SNP关联分析：
   GG基因型个体表现出显著抗哈维氏弧菌特性，而ARMS法可快速区分基因型(835bp内参片段)。

【结论与意义】
该研究首次揭示Lvlyz-i2剪接变异通过影响溶菌活性调控抗弧菌免疫，SNP 1271G>A可作为分子标记用于抗病育种。开发的ARMS检测技术将基因分型时间从数天缩短至4小时，为凡纳滨对虾抗弧菌品系选育提供关键技术支撑。研究发表于《Aquaculture》，为无脊椎动物先天免疫调控机制提供了新认知。