mRNA测序与供体关联分析在模拟案件样本中的应用：第3次和第4次EDNAP协作研究结果

本研究针对混合生物痕迹的刑事调查需求，通过欧洲DNA分型组(EDNAP)组织的第3次和第4次协作实验，评估了BFID-cSNP-BSS和BFID-cSNP-6F两种mRNA测序技术的性能。结果表明，这两种技术能可靠识别体液成分，并通过编码区SNP(cSNP)实现体液与供体的关联，为法医遗传学提供了跨实验室、跨测序平台的有效工具。

　　

在刑事调查中，混合生物痕迹的分析一直是个棘手的问题。传统体液鉴定(BFID)方法存在样本消耗大、特异性有限等缺点，而RNA分析技术因其高灵敏度和特异性成为新兴解决方案。然而，如何同时实现体液成分识别和供体关联仍是技术难点。欧洲DNA分型组(EDNAP)的研究人员通过两项协作实验，评估了基于mRNA测序的BFID-cSNP-BSS和BFID-cSNP-6F技术，为这一领域带来了突破性进展。

研究团队采用了两种关键技术：一是基于Ion Torrent S5^TM和Illumina MiSeq^TM平台的靶向mRNA测序技术，二是编码区SNP(cSNP)基因分型技术。实验使用了16个标准化模拟案件样本和实验室自备样本，涵盖血液、唾液、精液等六种体液/组织。

在"3.1.1 核酸提取与定量"部分，研究发现RNA提取效率存在实验室间差异，但高输入样本的体液识别一致性较高。通过比较mirVana^TM miRNA提取试剂盒与其他方法，证实标准化流程的重要性。

"3.1.3 体液鉴定"结果显示，BFID-cSNP-6F检测在14/16样本中正确识别体液成分，其中阴道分泌物和月经血标记物表现出最高特异性。值得注意的是，皮肤样本由于RNA含量低，鉴定成功率仅为25%。

"3.1.4 供体关联"分析表明，cSNP分型成功率与体液类型密切相关：血液(87.65%正确分型)和阴道分泌物(92%正确分型)表现最佳，而精液存在15.4%的基因型不一致率，主要归因于PRM1基因的等位基因丢失。

在"3.3 实验室与测序平台比较"中，两种测序平台表现相当，但Ion Torrent S5^TM检测到更多标记物。特别的是，两个实验室使用双平台分析相同cDNA样本，结果一致性达81%。

"3.4 替代cSNP面板比较"显示，BFID-cSNP-6F检测在10/16样本中正确识别体液，优于替代面板(8/16)，特别是在区分唾液与阴道分泌物方面更具特异性。

讨论部分指出，该研究首次在多实验室环境下验证了mRNA-cSNP技术的可靠性。虽然皮肤样本分析仍具挑战性，但该方法在血液、阴道分泌物等体液的供体关联方面表现出色，错误率低于3%。研究还揭示了平台间差异主要源于文库制备步骤，而非测序本身。

这项研究的意义在于：1)建立了跨实验室可重复的mRNA分析流程；2)证实cSNP分型可有效解决混合样本的供体溯源问题；3)为法医实践提供了同时进行体液鉴定和STR分型的技术路线。未来研究可进一步优化皮肤RNA检测方法，并扩展至更多体液类型，如直肠黏膜等。该成果为法医遗传学领域制定了新的技术标准，相关方法已被多个实验室纳入ISO17025认证体系。