意大利北部与西班牙中部利什曼原虫婴儿株引起皮肤利什曼病的遗传分化：基于Cpb-Hsp70分型的回顾性研究

为解决地中海欧洲地区皮肤利什曼病（TL）病原体遗传多样性不明的问题，意大利博洛尼亚大学与西班牙卡洛斯三世健康研究所团队联合开展研究，通过Hsp70（热休克蛋白70）和Cpb（半胱氨酸蛋白酶b）分型技术，揭示了意大利北部流行株存在L. infantum/L. donovani杂交特征，而西班牙中部菌株呈现经典L. infantum单倍型。该研究为欧洲利什曼病防控提供了关键分子流行病学证据，发表于《Infectious Diseases of Poverty》。

　　

在地中海欧洲地区，利什曼病这个由利什曼原虫引起的古老寄生虫病正悄然发生着不为人知的演化。尽管经典病原体利什曼原虫婴儿株（L. infantum）长期被认为是该区域人类内脏和皮肤利什曼病（VL/TL）的主要致病原，但近年来意大利北部和西班牙中部相继爆发的疫情却展现出令人困惑的临床差异——博洛尼亚地区黏膜病变高发，而马德里附近的富恩拉夫拉达则以皮肤病变为主。这种差异是否源于病原体本身的遗传变异？这个问题的答案不仅关乎疾病防控策略的精准制定，更可能揭示新发病原体杂交进化的重大公共卫生风险。

为解开这个谜团，博洛尼亚大学与西班牙卡洛斯三世健康研究所组成跨国团队，对两地87例TL病例样本展开回顾性研究。研究人员采用了两项关键分子分型技术：通过巢式PCR扩增Hsp70基因片段（覆盖593bp的N片段至262bp的Ps片段）检测单核苷酸多态性（SNP），同时利用Cpb基因39bp插入缺失（indel）特征区分L. infantum（361bp，E型）和L. donovani（400bp，F型）。样本队列包含意大利2016-2023年病例（42例）和西班牙2013-2016年疫情样本（45例），采用福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织与新鲜活检相结合的策略提升检测灵敏度。

研究结果
意大利北部菌株呈现显著遗传异质性
博洛尼亚地区的菌株群体展现出惊人的多样性：30.4%为Hsp70(A)_Cpb(F)单倍型，另有30.4%为Hsp70(G)_Cpb(E/F)嵌合型。尤为关键的是，Cpb(F)型本为L. donovani的特征标记，而E/F杂合型提示可能存在L. infantum/L. donovani杂交事件。这些发现与近期全基因组测序（WGS）发现的意大利北部VL菌株杂交特征形成互证。

西班牙中部流行株高度保守
富恩拉夫拉达所有可分型样本（42.2%）均表现为Hsp70(A)_Cpb(E)经典单倍型，与参考菌株JPCM5完全一致，属于利什曼原虫婴儿株主流谱系Linf1/MON-1。这种同质性解释了该地区以单纯皮肤病变为主的临床表现。

Cpb分型展现更强鉴别力
统计显示Cpb分型的Simpson多样性指数（0.626）显著高于Hsp70（0.512），证实其在菌株鉴别中的优势。

结论与意义
该研究首次通过多基因分型揭示了欧洲两大TL流行区病原体的根本差异：西班牙菌株保持经典L. infantum特征，而意大利北部流行株则携带L. donovani遗传标记，支持了杂交菌株在自然疫源地传播的假说。这种遗传分化可能解释两地临床表现差异，更警示杂交菌株可能具备未知的致病特性或药物敏感性。

研究团队特别强调，当前欧洲缺乏标准化的利什曼原虫分子监测体系，而Cpb-Hsp70联合分型为临床样本快速筛查提供了可行方案。随着气候变化推动媒介分布变化，这类具有杂交背景的菌株可能进一步扩散，亟需建立跨国监测网络。这项发表于《Infectious Diseases of Poverty》的成果，为理解病原体进化与疾病表型关联树立了新范式，也为精准防控提供了分子工具箱。