单细胞测序揭示血友病A/B伴抑制物患者对FVIII与FIX的差异化免疫应答机制

本研究针对血友病A（HA）和血友病B（HB）患者因替代疗法产生抑制物的临床难题，通过单细胞测序技术分析5例HA和5例HB患者的PBMCs，发现两组在淋巴细胞亚群组成、免疫细胞功能状态及B/T细胞克隆多样性上存在显著差异：HA组B细胞比例更高且更活跃，HB组则表现为CD4+ Th细胞优势活化。该成果为理解凝血因子分子特性差异引发的免疫应答机制提供了新视角。

　　

研究背景与意义
血友病是一种因凝血因子VIII（FVIII）或IX（FIX）缺乏导致的遗传性出血性疾病，替代疗法虽能有效控制症状，但约30%的HA和3-5%的HB患者会产生中和性抗体（抑制物），成为治疗失败的主要原因。临床观察发现，HA与HB抑制物的发生率及临床表现差异显著，但机制未明。这一现象提示FVIII与FIX可能触发不同的免疫应答路径，而传统研究方法难以解析其细胞异质性。为此，研究人员首次采用单细胞测序技术，从免疫微环境角度揭示两类患者对凝血因子的差异化反应机制。

关键技术方法
研究纳入5例HA和5例HB伴抑制物患者的外周血单个核细胞（PBMCs），通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）获得75,051个高质量细胞的转录组数据，结合免疫组库分析（BCR/TCR repertoire）评估克隆多样性，并采用生物信息学方法进行细胞亚群聚类和功能注释。

研究结果

1. 免疫细胞组成差异：HA组B细胞比例显著高于HB组（p<0.01），且呈现更强的活化标记基因表达；HB组则以CD4⁺ T辅助细胞（Th）扩增为特征，其IL-21等细胞因子分泌相关通路显著富集。
2. 克隆多样性特征：免疫组库分析显示HA组B细胞克隆扩增更集中，而HB组T细胞受体（TCR）多样性更高，提示FIX可能引发更广泛的T细胞应答。
3. 功能通路差异：HA组B细胞中抗原呈递相关基因（如HLA-DRA）上调，HB组Th细胞中TNF-α/NF-κB通路活跃，反映两类凝血因子触发的免疫激活机制不同。

结论与讨论
该研究首次在单细胞层面阐明HA与HB抑制物患者的免疫应答异质性：FVIII更易驱动B细胞主导的体液免疫，而FIX偏好激活CD4⁺ Th细胞介导的细胞免疫。这一发现为解释临床差异提供了理论依据，并提示未来治疗策略需针对不同分子特性定制——如HA患者或需靶向B细胞耗竭，HB患者则可能受益于Th细胞调控。研究数据为探索抗原分子特性与免疫识别的关系提供了宝贵资源，相关成果发表于《Blood Advances》。