病毒性出血性败血症病毒(VHSV)G蛋白信号肽替换为鱼精蛋白信号肽对病毒复制及免疫原性的影响

本研究针对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)糖蛋白信号肽(SP)功能优化问题，通过将天然vGsp替换为鱼精蛋白来源信号肽(Psp)，构建重组病毒rVHSV-PspvG。研究发现Psp显著提升分泌效率但降低病毒复制能力，诱导内质网应激并减弱对橄榄鲽的致病性。该成果为鱼类病毒减毒疫苗及DNA疫苗设计提供了SP工程化新思路，发表于《Fish》。

　　

病毒性出血性败血症病毒(VHSV)是水产养殖业的重要病原体，其糖蛋白(G蛋白)在病毒感染和免疫应答中起核心作用。信号肽(SP)作为引导蛋白质分泌的关键元件，其特性直接影响病毒复制效率和疫苗效果。然而，鱼类病毒中SP的工程化改造尚未系统研究，这限制了高效疫苗的开发。

为探索SP替换对病毒生物学特性的影响，国家研究基金会资助的研究团队通过反向遗传学技术，将VHSV G蛋白的天然信号肽(vGsp)替换为鱼精蛋白信号肽(Psp)。研究采用荧光素酶报告系统评估分泌效率，构建重组病毒rVHSV-PspvG，并在EPC细胞和橄榄鲽模型中系统分析其复制特性、致病性和疫苗保护效果。

主要技术方法

1. 荧光素酶报告系统定量比较vGsp与Psp的分泌效率
2. 反向遗传学构建重组病毒rVHSV-PspvG
3. 硫黄素T染色检测内质网应激
4. 橄榄鲽(Paralichthys olivaceus)体内病毒载量及生存率分析
5. DNA疫苗免疫保护实验

Secretory efficiency of different signal peptides
荧光素酶报告实验显示，Psp在24小时表达量显著高于vGsp（p<0.05），证实其更强的分泌引导能力。但Western blot显示Psp组存在未切割前体蛋白积累，提示潜在加工异常。

Characterization of recombinant VHSV
反向遗传学成功拯救的rVHSV-PspvG形成较小空斑（1.2±0.3 mm vs 野生型2.5±0.4 mm），复制滴度降低10倍。硫黄素T荧光增强2.1倍，表明Psp诱发内质网应激反应。

Pathogenicity and immunogenicity assessment
橄榄鲽攻毒实验显示，rVHSV-PspvG组存活率提高40%，头肾病毒载量降低100倍。PspvG DNA疫苗仅提供60%保护率，显著低于天然vG疫苗的100%。

讨论与结论
该研究首次揭示鱼类病毒SP替换的双刃剑效应：Psp虽增强G蛋白分泌，但通过诱发内质网应激干扰病毒组装，导致复制缺陷和毒力减弱。这种特性使其成为潜在的减毒疫苗候选株，但DNA疫苗中PspvG的免疫保护效率下降，说明SP修饰需平衡复制能力与抗原呈递效果。研究为水产疫苗开发提供了重要理论依据：SP工程化可作为鱼类病毒疫苗设计的精准调控工具，但必须系统评估其对病毒生命周期各环节的影响。成果对理解弹状病毒科成员蛋白质分泌机制与致病性关联具有重要启示。