小鼠胚胎及出生后早期卵巢淋巴管生成（Lymphangiogenesis）的动态特征与YAP1蛋白的异位表达模式研究

本研究针对卵巢淋巴管发育机制不清的问题，利用Prox1-EGFP转基因小鼠模型，结合LYVE1+/Prox1+双标记技术，首次系统揭示了小鼠出生后第7天（P7）启动的卵巢淋巴管从髓质向皮质的迁移规律，并发现该过程与卵泡成熟同步且伴随YAP1蛋白核质转位。为卵巢生理病理研究及淋巴相关疾病治疗提供了新靶点。

　　

研究背景与意义
卵巢作为女性生殖系统的核心器官，其血管网络研究已较为深入，但淋巴管系统却长期被忽视。这种"重血管轻淋巴"的研究现状，与卵巢癌高达60%的淋巴转移率形成鲜明反差。更令人困惑的是，尽管已知淋巴管生长因子（如VEGF-C）能促进肿瘤淋巴管生成，但正常卵巢淋巴管的发育时序、空间分布规律及其与卵泡发育的关联仍属空白。这一认知缺口严重制约了我们对卵巢生理和病理过程的理解，特别是卵巢癌淋巴转移的防控策略开发。

四川大学华西第二医院的研究团队在《Gene Expression Patterns》发表的研究，首次绘制了小鼠从胚胎期到出生后28天（P28）的卵巢淋巴管发育图谱。研究创新性地采用Prox1-EGFP荧光报告转基因小鼠模型，结合LYVE1/CD31免疫标记技术，揭示了卵巢淋巴管始于出生后第7天（P7）的髓质区，随后向皮质区延伸的时空规律。更引人注目的是，发现这一过程与卵泡发育阶段高度同步，且伴随Hippo通路关键效应因子YAP1的核质穿梭现象，为生殖系统淋巴研究开辟了新视角。

关键技术方法
研究团队构建了Prox1-EGFP转基因小鼠（委托金斯瑞公司完成），与野生型C57BL/6J小鼠对照。通过胚胎期（E13.5-E17.5）和出生后（P3-P28）多时间点采样，采用全组织免疫荧光（4色荧光试剂盒）、免疫组化（CD31/LYVE1/Prox1/YAP1抗体）和荧光立体显微镜观察技术。利用ImageJ进行定量分析，统计方法采用Kruskal-Wallis检验。

主要研究发现

3.1 淋巴管特异性Prox1-EGFP报告小鼠模型的验证
通过对比8周龄转基因鼠与野生鼠的生殖器官，证实Prox1-EGFP⁺信号与内源性Prox1/LYVE1共定位，且仅在转基因鼠卵巢髓质和子宫肌层检测到绿色荧光信号，确立该模型适用于淋巴管可视化研究。

3.2 卵巢血管发育早于淋巴管
CD31⁺血管内皮细胞在E13.5的性腺-中肾复合体即已出现，而Prox1⁺/LYVE1⁺淋巴管内皮细胞直至P7才在卵巢门附近髓质区首次检出，证实卵巢血管网络建立先于淋巴系统约2周。

3.3 出生后启动的卵巢淋巴管生成
时序分析显示：P3卵巢仅存在原始卵泡和CD31⁺血管；P7髓质区出现零星Prox1-EGFP⁺/LYVE1⁺淋巴管，同期初级卵泡形成；P10髓质区淋巴管密度显著增加，伴随次级卵泡出现；P14淋巴管延伸至皮质区，此时卵泡进入窦状阶段；P21-P28淋巴管持续增生，对应排卵前卵泡发育。

3.4 YAP1的异位表达模式
免疫组化揭示YAP1在颗粒细胞中的动态定位：P3以核表达为主；P7-P10向胞质转移（P<0.05）；P14后重新入核。这种核质穿梭与淋巴管生成关键期（P7-P14）及卵泡从初级到窦状的转化阶段完全重合。

结论与展望
该研究确立了三项重要发现：①卵巢淋巴管发育具有严格的时空特异性，始于P7并从髓质向皮质扩展；②淋巴管生成与卵泡成熟阶段存在精确同步性；③YAP1蛋白的亚细胞定位变化可能参与协调上述过程。这些发现不仅填补了生殖系统淋巴发育的理论空白，更提出了若干值得深究的科学问题：YAP1是否通过调控Prox1表达直接影响淋巴管内皮细胞分化？淋巴管延迟发育是否与卵巢免疫豁免特性相关？

从转化医学角度看，研究揭示的P7-P14关键时间窗，为干预卵巢淋巴异常增生（如卵巢癌淋巴转移）提供了潜在治疗靶点。YAP1的核质穿梭现象尤其值得关注，因其可能成为调控淋巴-卵泡协同发育的"分子开关"。未来研究可进一步探索Hippo-YAP/Prox1通路在生殖系统淋巴疾病中的调控机制，为开发特异性阻断卵巢癌淋巴转移的新策略奠定理论基础。