宫颈癌中潜在高危型HPV的病毒整合与融合转录特征及其致癌机制研究

本研究针对国际癌症研究机构(IARC)定义的潜在高危型HPV(pHR-HPV)在宫颈癌(CC)中的致癌机制不明确问题，通过HIVID和RNA-seq技术对8例pHR-HPV+样本进行分析，首次揭示pHR-HPV通过AGGTA基序介导基因组整合和转录融合，破坏宿主基因表达并促进E6/E7癌基因稳定表达。该研究为完善HPV筛查策略提供了重要分子依据。

　　

宫颈癌作为全球女性第四大恶性肿瘤，其发病与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关。然而，国际癌症研究机构(IARC)定义的"潜在高危型HPV"(pHR-HPV)如HPV34/66/73/82等，虽被归类为2B组"可能致癌"，但其分子机制研究长期滞后。这些病毒在进化树上与明确致癌的HR-HPV同源，流行病学数据显示其可感染宫颈组织，但临床检测常被忽视。更关键的是，HPV基因组整合被认为是致癌关键事件，但pHR-HPV是否具有类似HR-HPV的整合能力？其整合后如何影响宿主转录调控？这些问题直接关系到宫颈癌筛查策略的完善。

为解答这些科学问题，浙江大学医学院附属妇产科医院与华中科技大学同济医院的研究团队联合开展了一项创新研究。他们采用高灵敏度的高通量病毒整合检测技术(HIVID)和RNA测序(RNA-seq)，对8例pHR-HPV阳性宫颈癌样本进行多组学分析，相关成果发表在《Infection, Genetics and Evolution》期刊。

研究主要采用三项关键技术：1) HIVID捕获测序检测病毒整合位点，覆盖20种HPV型别；2) 基于Illumina NovaSeq平台的转录组测序分析融合转录本；3) 使用SVdetect软件识别病毒-人类嵌合序列。样本来源于两个独立队列：99例新鲜冷冻样本和97例已发表样本。

研究结果部分呈现四大发现：

3.1. 潜在高危型HPV介导HPV整合
在8例pHR-HPV⁺宫颈癌中均检测到病毒整合，整合位点广泛分布于人类基因组。与HR-HPV类似，pHR-HPV的断裂点主要位于E1/E2/L1/L2区，而E6/E7癌基因保持完整。人类基因组整合位点则集中于基因间区和内含子区，这种模式与已知HR-HPV整合特征高度一致。

3.2. pHR-HPV通过微同源介导机制整合
序列分析发现病毒与人类基因组在整合位点存在短序列同源区，证实pHR-HPV通过微同源介导修复(MMR)机制完成整合，这一机制与HR-HPV完全相同。

3.3. pHR-HPV-人类转录融合破坏正常转录并促进E6/E7表达
RNA-seq检测到大量病毒-人类融合转录本，主要发生在人类基因的基因间区(42%)、内含子(33%)和编码区(25%)。值得注意的是，病毒融合偏好发生在E1区(58%)，而E6/E7区仅占12%，这种选择性断裂使得癌基因得以完整表达。FPKM分析证实E6/E7表达量显著高于E1基因。

3.4. pHR-HPV通过AGGTA基序介导转录融合
深度分析发现HPV34-863、HPV66-910等高频融合位点均存在保守的AGGTA剪接基序。该基序在四种pHR-HPV的E1区高度保守，通过AG二核苷酸与人类序列连接，形成特异性剪接事件。这与HPV16中调控E7癌基因表达的880位点机制相似。

讨论部分强调，该研究首次系统阐明pHR-HPV通过"微同源整合-选择性断裂-保守基序剪接"三位一体的致癌机制：1) 通过MMR机制整合入宿主基因组；2) 选择性保留E6/E7癌基因完整性；3) 利用AGGTA基序介导异常剪接。这些特征使其虽被归类为"潜在高危型"，实际却共享HR-HPV的核心致癌通路。

研究的临床意义在于：当前HPV筛查主要关注HR-HPV，但pHR-HPV整合事件可能预示相似的致癌风险。特别是检测到AGGTA介导的融合转录时，应考虑加强临床监测。未来研究需扩大样本量验证这些发现，并探索靶向AGGTA基序的干预策略。

该成果为完善宫颈癌三级预防体系提供了分子层面的新证据，提示临床实践中应重视pHR-HPV的整合状态检测，对优化现有筛查方案具有重要指导价值。