水牛生乳中乳酸菌的分子多样性鉴定、系统发育分析及抗菌活性研究

本研究针对水牛生乳中乳酸菌的益生潜力，通过表型筛选、(GTG)5-PCR分型、16S rRNA测序及抑菌实验，成功鉴定出3种乳酸菌（包括Ligilactobacillus salivarius等），揭示其显著抑制金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的能力，为功能性乳制品开发提供科学依据。

　　

水牛乳作为全球第二大乳源，富含营养且胆固醇含量低于牛乳，但其微生物资源尚未充分开发。随着功能性食品需求增长，具有益生特性的乳酸菌（Lactobacillus）成为研究热点。然而，传统表型鉴定方法存在局限性，且水牛乳源乳酸菌的分子多样性及抗菌机制缺乏系统研究。针对这些问题，伊朗阿瓦士医科大学的研究团队从水牛生乳中分离乳酸菌，结合分子技术与功能验证，相关成果发表于《International Dairy Journal》。

研究采用五项关键技术：1) 表型筛选（MRS培养基、革兰染色）；2) 重复序列PCR（(GTG)₅-PCR）分型；3) 16S rRNA基因测序；4) 琼脂扩散法检测抗菌活性；5) 系统发育分析。样本来自伊朗阿瓦士地区的5份水牛生乳。

研究结果

1. 样本收集与表型鉴定：从5份生乳中分离出11株革兰阳性、过氧化氢酶阴性的杆状菌，排除球菌和酵母污染。
2. 分子分型：(GTG)₅-PCR将菌株分为5种基因型，片段大小100-1500 bp，显示水牛乳乳酸菌存在显著多样性。
3. 物种鉴定：16S rRNA测序确认3个物种：Ligilactobacillus salivarius（抑制活性最强）、Limosilactobacillus fermentum和Ligilactobacillus agilis，反映最新分类学修订（如Zheng et al. 2020提出的新属）。
4. 抗菌功能：对Staphylococcus aureus和Pseudomonas aeruginosa的抑菌圈达10.5-17.6 mm，L. salivarius效果最优，提示其通过产酸或细菌素发挥拮抗作用。

结论与意义
该研究首次系统解析伊朗水牛乳乳酸菌资源，证实(GTG)₅-PCR联合16S rRNA测序是高效可靠的菌株鉴定方案。发现的Ligilactobacillus salivarius等菌株具有开发为天然抗菌剂的潜力，可为发酵乳制品提质增效。研究还呼应了乳酸菌分类学革新（如从Lactobacillus重分为23个新属），为行业标准更新提供案例。未来可进一步探究抑菌物质（如细菌素）的作用机制，推动水牛乳高附加值产品研发。