零售牛肝中弯曲菌属多样性受孵育温度、时间及冷冻处理影响的机制研究

本研究针对零售牛肝中弯曲菌属（Campylobacter spp.）污染问题，系统评估了孵育温度（37?°C vs. 41.5?°C）、时间（24-72?h）及冷冻处理对菌株分离率的影响。通过mCCDA直接培养结合实时菌落PCR（polymerase chain reaction）和全基因组测序（Illumina），发现冷冻导致菌量减少0.6-1.4 log但未完全消除风险，且37?°C延长孵育可提升C. fetus检出率。成果为食品微生物安全控制提供重要数据支撑。

　　

研究背景
弯曲菌属（Campylobacter spp.）是导致人类食源性疾病的主要病原体之一，而零售牛肝作为常见食材，其高污染率（原文检出率达85%）成为公共卫生隐患。目前，实验室检测标准中孵育温度（41.5?°C）和时间（48?h）的设定可能低估了某些菌种（如C. fetus）的检出率，且冷冻储存对菌群存活的影响缺乏系统评估。针对这些问题，研究人员在《International Journal of Food Microbiology》发表论文，揭示了环境参数对弯曲菌属多样性的调控机制。

关键技术方法
研究团队采集20份气调包装零售牛肝样本，通过直接培养（mCCDA培养基）结合微需氧条件（37?°C/41.5?°C）分离菌株，利用实时菌落PCR（polymerase chain reaction）和Illumina全基因组测序（whole-genome sequencing）进行种属鉴定及序列分型（ST）。冷冻组样本（-20?°C）采用平行直接培养与富集法检测。

研究结果

1. 温度与时间效应：

   • 37?°C孵育72?h显著提高C. fetus检出率（6/20），而41.5?°C更利于C. jejuni生长。
   • 延长孵育至72?h使C. jejuni分离率提升30%（对比48?h）。

2. 冷冻处理影响：

   • 冷冻导致活菌数下降0.6-1.4 log，但4份样本仍检出弯曲菌（P<0.0001）。
   • 高初始污染样本（如含ST-48的C. jejuni）冷冻后仍具传播风险。

3. 菌群多样性：

   • 新鲜样本中C. jejuni ST-48/58和C. fetus ST-6为优势株（分别占4/20和5/20）。
   • 未检出C. coli、C. lari等物种，但多菌种混合污染现象普遍。

结论与意义
该研究首次证实降低孵育温度（至37?°C）和延长培养时间可优化弯曲菌属（尤其C. fetus）的检测灵敏度，为修订食品微生物检测标准提供依据。冷冻处理虽降低菌量，但高污染样本仍存风险，提示冷链运输需结合其他灭菌措施。全基因组数据（如ST-6的流行特征）为追溯食源性疾病暴发来源奠定了分子基础。