基于SYBR green与TaqMan探针的qPCR技术开发：黄尾鰤微孢子虫（M. seriolae）快速检测新策略

来自日本的研究人员针对养殖黄尾鰤（Seriola quinqueradiata）和杜氏鰤（S. dumerili）的微孢子虫病（Beko病），开发了基于SSU rRNA 5′保守序列的SYBR green和TaqMan探针双重qPCR检测体系。该研究通过设计特异性引物，实现0.5×104拷贝/20μl的高灵敏度检测，且两种方法效率均达97%以上，为水产流行病学调查提供了高效工具。

　　

微孢子虫Microsporidium seriolae（一种与真菌相关的胞内寄生虫）是日本养殖黄尾鰤（Seriola quinqueradiata）和杜氏鰤（S. dumerili）微孢子虫病（俗称Beko病）的病原体，可导致鱼苗至成鱼肌肉囊肿。本研究基于新发现的5′端小亚基核糖体RNA（SSU rRNA）保守短序列，开发了SYBR green染料法和TaqMan探针法两种实时定量PCR（qPCR）检测技术。

8株M. seriolae的SSU rRNA部分序列长度为1814-1820 bp。所设计的qPCR引物对M. seriolae具有高度特异性，不与Spraguea sp.的SSU rRNA发生交叉反应。SYBR green法的扩增效率为97.1-98.0%，TaqMan法达97.2-98.4%，两者最低检测限均为0.5×10⁴拷贝/20μl反应体系。在感染鱼样本中，仅需0.4 ng总基因组DNA即可检出病原体。临床样本验证显示，两种方法的扩增效率无显著差异。

该研究建立的qPCR技术为黄尾鰤养殖业提供了快速、精准的病原监测手段，将显著提升微孢子虫病流行病学调查效率。