基于qPCR技术的腹泻儿童与无症状感染者肠道聚集性大肠杆菌(EAEC)载量差异研究

本研究针对肠聚集性大肠杆菌(EAEC)在腹泻与无症状感染中的致病机制差异，通过标准化qPCR技术定量分析165例儿童粪便样本中的EAEC载量。结果显示腹泻患儿EAEC载量[2781细菌/mg]显著高于无症状组[138细菌/mg]，且载量与年龄、性别相关。该研究为EAEC致病阈值判定及流行区防控策略提供了重要分子依据。

　　

在全球范围内，儿童腹泻仍是威胁5岁以下婴幼儿健康的重大公共卫生问题，尤其在低收入和中等收入国家(LMIC)，气候变化更可能加剧其流行趋势。肠聚集性大肠杆菌(EAEC)作为腹泻病原体中的"变色龙"，既能引发急性/持续性腹泻，又可无症状定植于肠道，这种致病异质性长期困扰着研究人员。更棘手的是，既往基于毒力基因的检测方法难以解释：为何相同毒力基因谱的EAEC在不同宿主中表现迥异？这提示细菌载量可能是关键"开关"。

为破解这一谜题，来自中国的研究团队创新性地建立靶向aggR基因(EAEC核心调控因子)的qPCR检测体系，对秘鲁利马郊区165例2岁以下儿童的粪便样本(腹泻80例/无症状85例)进行绝对定量分析。研究采用CTAB法提取粪便DNA，以EAEC 042标准株构建质粒标准曲线，实现了5细菌/mg粪便的高灵敏度检测。

【主要技术方法】
研究团队从前期555名儿童的队列中筛选EAEC阳性样本，通过NotI酶切验证质粒标准品，建立覆盖10⁶-10¹拷贝/反应的qPCR标准曲线。采用ΔΔCt法计算细菌载量，统计比较两组差异并分析年龄/性别分层数据。

【结果】

1. 方法学验证：qPCR检测限达10个aggR基因拷贝(约5个细菌)/mg粪便，扩增效率≥93%，R²>0.99。
2. 载量差异：腹泻组中位载量2781细菌/mg(95%CI 688-6875)是对照组(138细菌/mg)的20倍，该差异在单一感染和混合感染中均显著。
3. 人口学特征：腹泻患儿中，>18月龄儿童载量高于低龄组，男童载量显著高于女童。

【结论与意义】
该研究首次通过标准化qPCR证实EAEC载量是区分致病与定植状态的关键指标，为"致病阈值"理论提供了量化证据。发现的高载量特征群体(男童、>18月龄)提示宿主-病原体互作存在性别和发育差异。所建立的检测方法可应用于流行区大规模筛查，对指导抗生素使用、预测疾病转归具有重要临床价值。论文发表于《Enfermedades infecciosas y microbiologia clinica (English ed.)》，为EAEC相关腹泻的精准诊断提供了新范式。