酶促甘油解法制备元宝枫籽油二酰基甘油及其神经保护作用研究

本研究针对神经退行性疾病治疗需求，通过优化元宝枫籽油(ATO)酶促甘油解工艺(1:1底物比，2% Novozym 435，60°C/24h)，实现二酰基甘油(DAG)产量>50%，经分子蒸馏纯化后纯度达98.7%。细胞实验证实40 μg mL?1 DAG可使H2O2损伤的PC12细胞存活率提升32%，ROS降低49%，为开发神经保护功能食品提供新策略。

　　

神经退行性疾病如阿尔茨海默病(AD)和帕金森病(PD)的发病机制中，氧化应激导致的神经元损伤是关键环节。元宝枫籽油(ATO)富含具有神经修复作用的神经酸(NA)，但其主要成分三酰基甘油(TAG)的生物利用度有限。二酰基甘油(DAG)虽具有更好的神经保护活性，但在天然油脂中含量不足5%。如何高效制备高纯度DAG并验证其神经保护效应，成为功能脂质研发的重要课题。

陕西省科技厅支持的研究团队在《Food Bioscience》发表论文，通过Novozym 435催化ATO甘油解反应，结合分子蒸馏纯化技术，成功获得高纯度DAG，并系统评价了其对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。研究采用酶反应条件优化、放大实验验证、两步纯化工艺建立等关键技术，通过CCK8法检测细胞活力、荧光探针法测定ROS水平、比色法分析MDA含量及SOD/GPx酶活性等实验方法。

【材料与方法】
研究使用机械压榨结合分子蒸馏精制的ATO（酸价0.24 mg g^?1），以Novozym 435为催化剂，在无溶剂体系中考察底物摩尔比、酶用量、温度和时间对DAG产率的影响。50倍放大实验验证工艺稳定性，分子蒸馏（100°C/0.1 mbar）联合硅胶柱色谱（洗脱剂乙酸乙酯:正己烷=1:9）实现DAG纯化。

【生产DAG的酶促甘油解】
优化条件（ATO:甘油=1:1，2%酶量，60°C，24h）下DAG产率>50%，放大实验保持50%产率且酶可重复使用6次。纯化后DAG纯度达98.74±0.14%，保留NA（5.67±0.33%）等关键脂肪酸。

【神经保护效应】
40 μg mL^?1 DAG处理使H₂O₂损伤的PC12细胞：
• 存活率提升32%（CCK8法）
• ROS水平降低49%（DCFH-DA荧光法）
• MDA含量降至20.8 μM mg^?1蛋白（硫代巴比妥酸法）
• SOD和GPx活性恢复至接近正常水平

【结论】
该研究首次建立ATO酶法制备高纯度DAG的标准化工艺，证实其通过清除ROS、抑制脂质过氧化、激活内源性抗氧化酶系统发挥神经保护作用。研究成果为开发基于ATO的功能食品和神经退行性疾病辅助治疗剂提供理论依据与技术支撑，同时为植物油脂高值化利用开辟新途径。工艺的规模化可行性（50倍放大）和酶重复使用性（6次循环）显著提升产业化应用前景。