癌症相关成纤维细胞来源的外泌体piR-35462通过FTO/Twist1通路促进口腔鳞癌进展的机制研究

为解决口腔鳞癌（OSCC）中肿瘤微环境（TME）调控机制不明的问题，中山大学孙逸仙纪念医院团队聚焦癌症相关成纤维细胞（CAFs）来源的外泌体piRNA作用。研究发现CAFs通过外泌体传递piR-35462至OSCC细胞，激活FTO介导的m6A去甲基化，上调Twist1表达并诱导上皮-间质转化（EMT），从而促进肿瘤进展。该成果为OSCC靶向治疗提供了新策略，发表于《BMC Oral Health》。

　　

口腔鳞癌（OSCC）是全球常见的恶性肿瘤，五年生存率仅50%，其高侵袭性和易转移特性严重威胁患者生命。肿瘤微环境（TME）中的癌症相关成纤维细胞（CAFs）被认为是肿瘤进展的"帮凶"，但CAFs如何通过外泌体调控OSCC的分子机制仍是未解之谜。更令人困惑的是，近年来发现的PIWI相互作用RNA（piRNA）在多种癌症中异常表达，却鲜有研究揭示其在CAFs与OSCC细胞对话中的作用。

中山大学孙逸仙纪念医院的研究团队通过系统的实验设计，首次揭示了CAFs来源的外泌体piR-35462通过表观遗传调控促进OSCC转移的全新机制。研究人员从OSCC患者组织中分离CAFs和正常成纤维细胞（NFs），通过超速离心法提取外泌体，并采用小RNA测序筛选差异表达的piRNA。体内外实验证实，CAFs外泌体中的piR-35462可被OSCC细胞内化，通过稳定FTO蛋白（fat mass and obesity-associated protein）的mRNA，降低Twist1转录本的m⁶A甲基化水平，最终激活上皮-间质转化（EMT）程序。这项突破性成果发表于《BMC Oral Health》，为OSCC的精准治疗提供了新的靶点。

关键技术方法包括：1）从76例OSCC患者配对样本中分离CAFs和NFs；2）超速离心结合纳米颗粒追踪分析（NTA）分离表征外泌体；3）小RNA测序筛选差异piRNA；4）荧光原位杂交（FISH）示踪piR-35462胞内定位；5）双荧光素酶报告基因验证piR-35462与FTO 3'UTR结合；6）裸鼠移植瘤模型评估体内效应。

CAFs来源的外泌体促进OSCC细胞增殖和转移
通过免疫荧光和Western blot验证CAFs特异性标志物α-SMA和FAP高表达。电镜显示CAFs外泌体具有典型双层膜结构（直径219nm），富含CD63和TSG101。共培养实验证实，CAFs外泌体可被OSCC细胞高效摄取，显著增强细胞增殖（CCK-8和EdU实验）、迁移和侵袭能力（Transwell实验），并诱导EMT标志物Twist1和Vimentin上调。

piR-35462在CAFs外泌体中富集且预示不良预后
RNA测序发现piR-35462在CAFs外泌体中表达量较NFs高3.2倍（p<0.01）。76例临床样本分析显示，piR-35462高表达与淋巴结转移（N1/N2期，p=0.003）和患者生存期缩短显著相关（p=0.043）。通过GW4869（外泌体分泌抑制剂）和Rab27A敲低实验证实，OSCC细胞中piR-35462升高源自CAFs外泌体转移而非内源性合成。

外泌体piR-35462通过FTO/Twist1轴驱动EMT
RNA稳定性实验显示，piR-35462通过结合FTO mRNA的3'UTR延长其半衰期（t_1/2从4.2h增至7.8h）。FTO过表达导致Twist1 mRNA的m⁶A甲基化水平降低41%，增强其稳定性。双荧光素酶报告基因证实，突变piR-35462结合位点可完全阻断其对FTO的调控作用。动物实验进一步验证，CAFs-shRab27a组肿瘤体积较CAFs组减小58%（p<0.01），且EMT标志物表达逆转。

该研究首次阐明CAFs通过外泌体piR-35462-FTO-Twist1轴重塑肿瘤微环境的级联机制：piR-35462作为"分子桥梁"连接CAFs与OSCC细胞，通过表观遗传调控激活EMT程序。这不仅解释了OSCC高度转移性的分子基础，更揭示了外泌体piRNA可作为新型液体活检标志物。特别值得注意的是，FTO作为m⁶A去甲基化酶，其调控机制为开发小分子抑制剂提供了精确靶点。未来针对该通路的联合治疗策略，或将显著改善OSCC患者的预后。