斑马鱼基因精准编辑新突破：Prime editing技术显著提升CRISPR介导的基因敲入效率

研究人员针对斑马鱼CRISPR介导的同源定向修复(HDR)基因敲入(KI)效率低的问题，通过优化Cas9剂量(200-800 pg)、Alt-R HDR模板和注射方法，发现Prime editing技术能将编辑效率(EE)提升4倍，显著减少脱靶效应，为人类疾病模型构建提供新工具。

　　

斑马鱼作为人类遗传疾病研究的明星模型，其基因敲除(KO)技术已趋成熟，但精准引入疾病相关变异的基因敲入(KI)仍面临编辑效率(EE)低和脱靶效应两大难题。科研团队系统评估了CRISPR-Cas9介导的同源定向修复(HDR)四大优化策略：通过梯度实验发现Cas9最佳注射量为200-800 pg；采用化学修饰的Alt-R HDR模板可提升整合效率；细胞质直接注射相比卵黄注射并无优势；而阻断向导RNA结合的"guide-blocking"变异设计收效甚微。令人振奋的是，新兴的Prime editing技术展现出碾压性优势——对四个靶点的编辑效率飙升至HDR的4倍，F₀代阳性个体数量显著增加，且脱靶风险更低。这项研究为斑马鱼基因组精准编辑树立了新标杆，将加速人类疾病机制的解析进程。