电针通过下调lncRNA Neat1抑制NLRC4炎症小体通路减轻脑缺血再灌注损伤的神经保护机制

本研究揭示电针（EA）通过靶向长链非编码RNA Neat1，抑制NLRC4炎症小体（NLRC4/Caspase-1/GSDMD）通路，减少神经元焦亡（pyroptosis）和神经炎症，显著改善脑缺血/再灌注损伤（CIRI）大鼠的神经功能缺损和脑组织损伤。该发现为EA治疗缺血性卒中提供了新靶点（Neat1/NLRC4轴）和理论依据。

　　

引言

缺血性卒中因脑血流中断导致神经元死亡和神经功能障碍，其病理机制与神经炎症和细胞程序性死亡密切相关。电针（EA）作为传统中医疗法，已被证实可通过调节微胶质细胞极化和细胞焦亡（pyroptosis）发挥神经保护作用，但具体分子机制尚未阐明。近年研究发现，长链非编码RNA（lncRNA）Neat1在卒中后异常高表达，通过激活NLRC4炎症小体促进Caspase-1依赖的神经元焦亡和促炎因子（IL-1β/18）释放。本研究首次揭示EA通过下调Neat1抑制NLRC4通路，从而减轻脑缺血再灌注损伤（CIRI）的新机制。

材料与方法

实验采用SD大鼠大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型，分为假手术组、缺血再灌注（I/R）组、EA治疗组（I/R+EA）、EA联合空载病毒对照组（I/R+EA+Lv-Ctrl）及EA联合Neat1过表达组（I/R+EA+Lv-Neat1）。EA刺激穴位为曲池（LI11）和足三里（ST36），参数为2V/4-20Hz，每日30分钟。通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光和透射电镜（TEM）等技术检测Neat1表达、NLRC4炎症小体激活（NLRC4/Caspase-1/GSDMD）、神经元焦亡及神经胶质细胞活化标志物（Iba1⁺/CD11b⁺微胶质细胞、GFAP⁺/Nestin⁺/Sox2⁺星形胶质细胞）。神经功能评估采用改良神经功能缺损评分（mNSS）、平衡木和旋转棒测试。

结果

EA通过下调Neat1减轻脑损伤
TTC染色显示EA显著减少梗死体积（IV），而Neat1过表达逆转此效应。MRI和脑水肿检测证实EA降低IV和水分含量，改善血脑屏障完整性。

EA改善神经功能依赖Neat1下调
行为学测试表明EA组mNSS评分降低、平衡木通过时间缩短、旋转棒停留时间延长，但Neat1过表达组神经功能恢复被显著抑制。

EA抑制神经元损伤和焦亡
免疫荧光显示EA减少MAP2降解和NeuN⁺神经元丢失，TEM观察到EA维持神经元形态完整。WB证实EA下调NLRC4、Cleaved Caspase-1和GSDMD-N表达，减少TUNEL⁺凋亡细胞，而Neat1过表达阻断上述保护作用。

EA调节神经胶质活化与炎症平衡
EA抑制促炎微胶质细胞（Iba1⁺/CD11b⁺），促进抗炎因子（TGF-β1/IL-4/10）分泌，同时增加梗死周边区（PIA）神经干细胞标志物Nestin⁺/Sox2⁺表达，增强神经发生能力。ELISA检测显示EA降低TNF-α和IL-1β/18水平，Neat1过表达则逆转这些变化。

讨论

本研究首次阐明EA通过靶向lncRNA Neat1调控NLRC4炎症小体通路的分子机制：

1. Neat1作为关键调控节点：EA特异性下调Neat1表达，抑制NLRC4炎症小体组装，减少Caspase-1介导的GSDMD切割和IL-1β/18释放，从而减轻神经元焦亡。
2. 神经胶质双重调节：EA通过Neat1抑制促炎微胶质细胞极化（M1型），同时激活反应性星形胶质细胞的神经再生潜能（Nestin⁺/Sox2⁺），形成有利于神经修复的微环境。
3. 临床转化意义：为EA治疗缺血性卒中提供精准靶点（Neat1/NLRC4轴），其多靶点调控特性优于单一抑制剂。

结论

EA通过lncRNA Neat1/NLRC4通路抑制神经元焦亡和神经炎症，促进神经功能恢复。该机制为卒中后神经保护提供了新型治疗策略，未来需进一步验证LI11/ST36穴位的特异性调控网络。